Efeito da resistência à morte celular por perda de adesão (anoikis) na expressão do sindecam-4 e no ciclo celular de células endoteliais em cultura
Data
2013-04-25
Autores
Carneiro, Bruna Ribeiro 
Orientadores
Azevedo, Carla Cristina Lopes de
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Tumors produce several molecules that facilitate their proliferation, invasion and maintenance, especially proteoglycans. The syndecan-4, a heparan sulfate proteoglycan, can act as a co-receptor of growth factors and proteins of the extracellular matrix (ECM) by increasing the affinity of adhesion molecules to their specific receptors. It participates together with integrins and FAK (focal adhesion kinase) in cell adhesion at focal contacts connecting the ECM to the cytoskeleton. Changes in the expression of syndecan-4 have been found in tumor cells, indicating its involvement in cancer. The acquisition of resistance to cell death induced by blockade of adhesion to the substrate (anoikis resistance) is a feature of neoplastic transformation and a critical step during the metastatic process. Aiming to clarify the role of sindecan-4 in the process of anoikis and in the processes of cell transformation, wild endothelial cells (EC) were subjected to transformation induced by blockade of adhesion to the substrate (Adh-EC) and studied in comparison with endothelial cells transfected with the EJ-ras oncogene (EJ-ras EC) in relation to: tumorigenic capacity, adhesive ability, cell cycle, cell proliferation, synthesis and degradation of sulfated glicosaminoglycans (SGAG), expression and localization of syndecam-4 and heparanase expression. After cycles of blocking adhesion, phenotypic changes were observed in the surviving cells. The clones obtained exhibited characteristics similar to tumorigenic cells: multilayer growth, loss of contact inhibition, tumorigenic capacity, uncontrolled cell cycle, differences at the dependence of growth factors present in fetal bovine serum (FBS), decreased adhesive capacity and a major anti-proliferative effect after treatment with specific inhibitors of PI3K/Akt e Ras/Raf/MAPK/ERK pathways. Further, an increase in the synthesis of heparan sulfate (HS) was detected in the clones resistant to anoikis. This increase is observed for both HS chains present in cells and secreted to culture medium. Structural changes in HS chains were also observed. We have seen that there is an increase in the syndecan-4 and heparanase expression in EJ-ras EC and Adh-EC cells. The data suggests that the syndecan-4 is involved in the acquisition of resistance to cell death induced by blockade of adhesion to the substrate (resistance to anoikis), contributing to neoplastic transformation.
Os tumores produzem diversas moléculas que facilitam sua proliferação, manutenção e invasão, com destaque para os proteoglicanos. O sindecam-4, um proteoglicano de heparam sulfato, pode atuar como co-receptor de fatores de crescimento e proteínas de matriz extracelular (MEC) aumentando a afinidade das moléculas de adesão a seus receptores específicos. Alterações na expressão do sindecam-4 têm sido descritas em células tumorais, indicando o seu envolvimento em neoplasias. A aquisição da resistência à morte celular induzida por bloqueio da adesão ao substrato (resistência ao anoikis) é uma característica de transformação neoplásica e um passo crítico durante o processo metastático. Buscando entender o papel do sindecam-4 no processo de anoikis e nos processos de transformação celular, células endoteliais selvagens (EC) foram submetidas à transformação induzida pelo impedimento de adesão (Adh-EC) e estudadas comparando-se com células endoteliais transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras EC) em relação a: capacidade tumorigênica, capacidade adesiva, ciclo celular, proliferação celular, síntese e degradação de glicosaminoglicanos sulfatados (GAGs), expressão e localização do sindecam-4 e expressão da heparanase. Após os ciclos de desadesão, alterações fenotípicas foram observadas nas células sobreviventes. Os clones obtidos apresentaram características similares às células tumorigênicas: crescimento em multicamadas, perda de inibição por contato, capacidade tumorigênica, descontrole do ciclo celular, diferenças na dependência dos fatores de crescimento presentes no soro fetal bovino (SFB), diminuição da capacidade adesiva e maior efeito anti-proliferativo após tratamento com inibidores específicos das vias PI3K/Akt e MAPK/ERK (Ras/Raf/MEK/ERK). Ainda, um aumento nas sínteses de heparam sulfato (HS) foi detectado nos clones resistentes ao anoikis. Este aumento é observado tanto para as cadeias de HS presentes nas células, como para as secretadas para o meio de cultura. Modificações estruturais nas cadeias de HS também foram observadas. Vimos que ocorre um aumento na expressão do sindecam-4 e da heparanase nas células EJ-ras EC e nos clones resistentes ao anoikis. Os dados sugerem que o sindecam-4 está envolvido na aquisição da resistência à morte celular induzida por bloqueio da adesão ao substrato (resistência ao anoikis), contribuindo para a transformação neoplásica.
Os tumores produzem diversas moléculas que facilitam sua proliferação, manutenção e invasão, com destaque para os proteoglicanos. O sindecam-4, um proteoglicano de heparam sulfato, pode atuar como co-receptor de fatores de crescimento e proteínas de matriz extracelular (MEC) aumentando a afinidade das moléculas de adesão a seus receptores específicos. Alterações na expressão do sindecam-4 têm sido descritas em células tumorais, indicando o seu envolvimento em neoplasias. A aquisição da resistência à morte celular induzida por bloqueio da adesão ao substrato (resistência ao anoikis) é uma característica de transformação neoplásica e um passo crítico durante o processo metastático. Buscando entender o papel do sindecam-4 no processo de anoikis e nos processos de transformação celular, células endoteliais selvagens (EC) foram submetidas à transformação induzida pelo impedimento de adesão (Adh-EC) e estudadas comparando-se com células endoteliais transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras EC) em relação a: capacidade tumorigênica, capacidade adesiva, ciclo celular, proliferação celular, síntese e degradação de glicosaminoglicanos sulfatados (GAGs), expressão e localização do sindecam-4 e expressão da heparanase. Após os ciclos de desadesão, alterações fenotípicas foram observadas nas células sobreviventes. Os clones obtidos apresentaram características similares às células tumorigênicas: crescimento em multicamadas, perda de inibição por contato, capacidade tumorigênica, descontrole do ciclo celular, diferenças na dependência dos fatores de crescimento presentes no soro fetal bovino (SFB), diminuição da capacidade adesiva e maior efeito anti-proliferativo após tratamento com inibidores específicos das vias PI3K/Akt e MAPK/ERK (Ras/Raf/MEK/ERK). Ainda, um aumento nas sínteses de heparam sulfato (HS) foi detectado nos clones resistentes ao anoikis. Este aumento é observado tanto para as cadeias de HS presentes nas células, como para as secretadas para o meio de cultura. Modificações estruturais nas cadeias de HS também foram observadas. Vimos que ocorre um aumento na expressão do sindecam-4 e da heparanase nas células EJ-ras EC e nos clones resistentes ao anoikis. Os dados sugerem que o sindecam-4 está envolvido na aquisição da resistência à morte celular induzida por bloqueio da adesão ao substrato (resistência ao anoikis), contribuindo para a transformação neoplásica.
Descrição
Citação
CARNEIRO, Bruna Ribeiro. Efeito da resistência à morte celular por perda de adesão (anoikis) na expressão do sindecam-4 e no ciclo celular de células endoteliais em cultura. 2013. 80 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Ciências Ambientais, Químicas e Farmacêuticas, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Diadema, 2013.