Avaliação da atividade da nifuroxazida sobre via JAK/STAT em linhagens de câncer de tireoide através da deleção do gene STAT3 por CRISPR/CAS9
Data
2023-12-05
Autores
Takei, Juliana Ogoshi 
Orientadores
Rubio, Ileana Gabriela Sanchez de
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Título da Revista
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Resumo
O câncer é uma das maiores causas de morte no mundo, totalizando aproximadamente
10 milhões de mortes no ano de 2020 e com previsão de aumento para os próximos anos. O
câncer de tireoide está entre os tipos mais comuns, atingindo muito mais mulheres do que
homens. Entre seus subtipos, o câncer anaplásico de tireoide (ATC) é o menos comum, porém
é o mais agressivo e com maior taxa de mortalidade. Atualmente o tratamento para ATC é feito
através da tireoidectomia seguida de radioterapia e, em muitos casos, quimioterapia, uso de
drogas multikinases, terapia alvo e imunoterapia. No entanto a sobrevida dos pacientes é
limitada, variando entre 5 a 12 meses. Devido a alta instabilidade genômica das células do
câncer, na maioria dos casos essas terapias perdem a eficácia, sendo necessária a busca por
outras opções de tratamento. A nifuroxazida (NFZ) é um antibiótico já utilizado
comercialmente em alguns países para o tratamento de colite e diarreia, mas estudos recentes
demonstraram que essa droga é uma potencial alternativa de tratamento para alguns tipos de
tumor, como por exemplo câncer de mama e colorretal. A NFZ atua através da via JAK/STAT,
inibindo a fosforilação de seu componente STAT3, cuja ativação constitutiva já foi relacionada
ao surgimento e manutenção de alguns tumores. Em estudo prévio do nosso grupo verificamos
que a NFZ diminui viabilidade celular e induziu morte por apoptose. Este projeto teve como
objetivo investigar se a NFZ atua através do STAT3 na linhagem celular de ATC HTH83
através da introdução de uma deleção no gene STAT3 por CRISPR/CAS9. Para tanto, foi
realizada a edição gênica utilizando um plasmídeo contendo a sequência guia para STAT3 e o
gene de CAS9. Após transfeccão e seleção com puromicina, o sucesso da deleção foi
confirmado por amplificação e sequenciamento do DNA das células editadas. Foram escolhidos
dois clones que apresentaram STAT3 com deleção de 17 (A6) e 12 (B5) pares de bases. Foi
confirmada a inibição da expressão de STAT3 em A6 por Western Blot, enquanto B5 mostrou
uma expressão bem baixa. Por fim, foi avaliada a viabilidade através de ensaios de MTT que
sugeriram que a NFZ não diminui a viabilidade celular de A6, mas que teve algum efeito no
clone B5. Por último, foi iniciada a avaliação da capacidade de formação de colônias das células
editadas e selvagens tratadas com NFZ. Dessa maneira sos resultados sugerem que a NFZ
perdeu atividade na linhagem com STAT3 deletado, indicando que atuaria através da via
JAK/STAT na linhagem de ATC HTH83.