Caracterização de tipos capsulares de Streptococcus agalactiae de gestantes portadoras e isolados de hemoculturas de recém-nascidos
Nenhuma Miniatura disponível
Data
2020-12-01
Autores
Fonseca, Clara De Resende Lopes [UNIFESP]
Orientadores
Pignatari, Antonio Carlos Campos [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Introduction: Grup B Streptococcus (GBS) is an important pathogen in neonates, pregnant women and immunocompromised people. Two serious infections are reported in newborns (NB): early infection (early onset disease - EOD) and late infection (late onset disease - LOD). GBS isolates can synthesize 10 different serotypes of capsular antigens (CPS), in addition to virulence and resistance factors described in the literature. It is evident that serotype III, belonging to the clonal complex (CC) 17, as the most prevalent among cases of LOD, the presence of the hvgA gene increases the bacterial capacity to overcome the blood-brain barrier. Objective: To characterize the capsular types, to determine the phylogenetic relationship and to investigate virulence and resistance genes of Streptococcus agalactiae of pregnant women and isolated from blood cultures of newborns. Methods: Three hundred and fifty-two isolates, 348 from genital swabs and four from blood cultures of newborns admited to a maternity hospital in the city of São Paulo, Brazil, were submitted to identification by MALDI-TOF/MS, amplification of the cfb gene and identification of the capsular serotype by the polymerase chain reaction (PCR) technique with a score above 2. Eleven isolates were selected, seven belonging to different serotypes and four from blood cultures of newborns, and submitted to pulsed field electrophoresis (PFGE), disc diffusion sensitivity test and new generation sequencing (WGS), using the Illumina platform (MiSeq). Results: The identification of the isolates as Streptococcus agalactiae was confirmed in 97% of the isolates (N = 341) using the MALDI-TOF/MS technique. Five isolates (1.4%) did not have their serotyping identified by PCR, and serotype VIII was more difficult to identify using this methodology. Among the 11 isolates submitted to PCR and WGS, there was a discrepancy in the results between two isolates of serotype VIII and one NT isolate. The prevalence of serotypes found in the study was: Ia (36.1%; n = 127), V (34.1%, n = 120), II (12% n = 42), III (10.2%, n = 36), Ib (6.5%, n = 23) and IV (1.1%, n = 4). The isolates submitted to WGS showed high genetic variability, different sequence type (ST) and clonal complexes (CC). The hvgA gene was detected in two isolates, belonging to the hypervirulent clone of CC17. The sensitivity profile of the isolates corroborated with the resistance genes detected in silico by WGS analysis, with emphasis on the higher level of resistance presented by the isolates that cause infections in newborns.
Introdução: Streptococcus do grupo B (GBS) é um importante patógeno de neonatos, mulheres grávidas e indivíduos imunocomprometidos. Duas infecções graves são relatadas em recém-nascidos (RN): a infecção precoce (early onset disease - EOD) e a infecção tardia (late onset disease - LOD). Isolados de GBS podem sintetizar 10 sorotipos diferentes de antígenos capsulares (CPS), além de fatores de virulência e resistência já bem descritos na literatura. Evidencia-se o sorotipo III, pertencente ao complexo clonal (CC) 17, como o mais prevalente entre os casos de LOD, a presença do gene hvgA aumenta a capacidade bacteriana de ultrapassar a barreira hematoencefálica. Objetivo: Caracterizar os tipos capsulares, determinar a relação filogenética e investigar genes de virulência e resistência de Streptococcus agalactiae de gestantes portadoras e isolados de hemoculturas de recém-nascidos. Métodos: Trezentos e cinquenta e dois isolados, 348 de swabs genitais de gestantes e 4 de hemoculturas de recém-nascidos internados em maternidade da cidade de São Paulo, foram submetidos à identificação por MALDITOF/MS, amplificação do gene cfb e identificação do sorotipo capsular pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Onze isolados foram submetidos à eletroforese de campo pulsado (PFGE), teste de sensibilidade por disco-difusão e sequenciamento de nova geração (WGS), utilizando a plataforma Illumina (MiSeq). Resultados: A identificação dos isolados como Streptococcus agalactiae foi confirmada em 97% dos isolados (n=341) pela técnica de MALDI-TOF/MS com score acima de 2. Cinco isolados (1,4%) não tiveram sua sorotipagem identificada por PCR, sendo o sorotipo VIII com maior dificuldade para identificação por essa metodologia. Onze isolados foram selecionados, sete pertencentes aos diferentes sorotipos e os quatro isolados de hemoculturas. Dentre os 11 isolados submetidos à PCR e WGS, houve discrepância dos resultados entre dois isolados do sorotipo VIII e um isolado NT. A prevalência dos sorotipos encontrada no estudo foi: Ia (36,1%; n=127), V (34,1%, n=120), II (12% n=42), III (10,2%, n=36), Ib (6,5%, n=23) e IV (1,1%, n=4). Os isolados submetidos à WGS apresentaram alta variabilidade genética, diferentes sequence type (ST) e complexos clonais (CC). O gene hvgA foi detectado em dois isolados, pertencentes ao clone hipervirulento do CC17. O perfil de sensibilidade dos isolados corroborou com os genes de resistência detectados insilico por análise do WGS, com destaque para o maior nível de resistência apresentado pelos isolados causadores de infecções em RN.
Introdução: Streptococcus do grupo B (GBS) é um importante patógeno de neonatos, mulheres grávidas e indivíduos imunocomprometidos. Duas infecções graves são relatadas em recém-nascidos (RN): a infecção precoce (early onset disease - EOD) e a infecção tardia (late onset disease - LOD). Isolados de GBS podem sintetizar 10 sorotipos diferentes de antígenos capsulares (CPS), além de fatores de virulência e resistência já bem descritos na literatura. Evidencia-se o sorotipo III, pertencente ao complexo clonal (CC) 17, como o mais prevalente entre os casos de LOD, a presença do gene hvgA aumenta a capacidade bacteriana de ultrapassar a barreira hematoencefálica. Objetivo: Caracterizar os tipos capsulares, determinar a relação filogenética e investigar genes de virulência e resistência de Streptococcus agalactiae de gestantes portadoras e isolados de hemoculturas de recém-nascidos. Métodos: Trezentos e cinquenta e dois isolados, 348 de swabs genitais de gestantes e 4 de hemoculturas de recém-nascidos internados em maternidade da cidade de São Paulo, foram submetidos à identificação por MALDITOF/MS, amplificação do gene cfb e identificação do sorotipo capsular pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Onze isolados foram submetidos à eletroforese de campo pulsado (PFGE), teste de sensibilidade por disco-difusão e sequenciamento de nova geração (WGS), utilizando a plataforma Illumina (MiSeq). Resultados: A identificação dos isolados como Streptococcus agalactiae foi confirmada em 97% dos isolados (n=341) pela técnica de MALDI-TOF/MS com score acima de 2. Cinco isolados (1,4%) não tiveram sua sorotipagem identificada por PCR, sendo o sorotipo VIII com maior dificuldade para identificação por essa metodologia. Onze isolados foram selecionados, sete pertencentes aos diferentes sorotipos e os quatro isolados de hemoculturas. Dentre os 11 isolados submetidos à PCR e WGS, houve discrepância dos resultados entre dois isolados do sorotipo VIII e um isolado NT. A prevalência dos sorotipos encontrada no estudo foi: Ia (36,1%; n=127), V (34,1%, n=120), II (12% n=42), III (10,2%, n=36), Ib (6,5%, n=23) e IV (1,1%, n=4). Os isolados submetidos à WGS apresentaram alta variabilidade genética, diferentes sequence type (ST) e complexos clonais (CC). O gene hvgA foi detectado em dois isolados, pertencentes ao clone hipervirulento do CC17. O perfil de sensibilidade dos isolados corroborou com os genes de resistência detectados insilico por análise do WGS, com destaque para o maior nível de resistência apresentado pelos isolados causadores de infecções em RN.