Expressão gênica em células osteobláticas humanas após irradiação de laser de baixa intensidade
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Data
2018-11-28
Autores
Bomfim, Fernando Russo Costa do [UNIFESP]
Orientadores
Plapler, Helio [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
The aim of this study was to evaluate the effects of lowlevel
laser, through gene
expression, in calcium signaling, bone mineralization and cellular stress mechanisms
in human osteoblasts. Cell cultures of osteoblastic lineage hFOB1.19 were cultured
and assigned into two groups, control (C; n = 78) and laser (L; n = 78) with n = 6 per
day of the experimental period. After maturation, cells of the L group were irradiated
with a Gallium and Aluminum Arsenide lowlevel
laser device, λ = 808 nm, 200 mW
nominal power, power density of 200m W/cm2, energy dose or flow rate of 37J/cm2,
area of beam of 0,02mm2, time of 5 s, energy of 1 J, at an application point, daily, for
13 days. Then, cell counts were performed and RNA was extracted, quantified,
submitted to cDNA synthesis and quantified by comparative Ct by realtime
polymerase chain reaction. The values were submitted to statistical analysis by MannWhitney
test with p<0,05. The analysis of the cell count was statistically superior in the
L group (37,25x104±22,02) in relation to the control group (22,75x104±7.660) with (p
= 0,0259) and the values of 2ΔΔCt
presented for the genes S100A6, PMCA,
calmodulin and FKBP4 hyper expression on the thirteenth day, whereas osteocalcin
presented hypo expression and iNOS remained constant in the L and C groups. It is
suggested that the mechanism of action of lowlevel
laser is possibly, dosedependent
and cumulative and the cell cycle phases are related to human osteoblasts.
O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do laser de baixa intensidade, através da expressão gênica, na sinalização de cálcio, mineralização óssea e mecanismos de estresse celular em osteoblastos humanos. Culturas celulares da linhagem osteoblástica hFOB1.19 foram cultivados e distribuídos em dois grupos, controle (C; n=78) e laser (L; n=78) com n=6 por dia do período experimental. Após maturação, as células do grupo L foram irradiadas com laser de baixa intensidade de Arseneto de Gálio e Alumínio, λ=808nm, 200mW de potência nominal, densidade de potência de 200mW/cm2, dose de energia ou fluência de 37J/cm2, área de feixe de 0,02mm2, tempo de 5s, energia de 1J, em um ponto de aplicação, diariamente, durante 13 dias. Em seguida, foram realizadas contagens celulares e o RNA foi extraído, quantificado, submetido a síntese de cDNA e realizada quantificação de Ct comparativo pela técnica de reação em cadeia da polimerase em tempo real. Os valores foram submetidos à análise estatística pelo teste MannWhitney com p<0,05. A análise da contagem celular foi estatisticamente superior no grupo L (37,25x104±22,02) em relação ao grupo controle (22,75x104±7,660) com (p=0,0259) e os valores de 2ΔΔCt apresentaram para os genes S100A6, PMCA, calmodulina e FKBP4 hiper expressão no décimo terceiro dia, enquanto a osteocalcina apresentou hipo expressão e iNOS mantevese constante nos grupos L e C. Sugerese que o mecanismo de ação do laser de baixa intensidade é, possivelmente, dosedependente e acumulativo e estar relacionado às fases do ciclo celular em osteoblastos humanos.
O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do laser de baixa intensidade, através da expressão gênica, na sinalização de cálcio, mineralização óssea e mecanismos de estresse celular em osteoblastos humanos. Culturas celulares da linhagem osteoblástica hFOB1.19 foram cultivados e distribuídos em dois grupos, controle (C; n=78) e laser (L; n=78) com n=6 por dia do período experimental. Após maturação, as células do grupo L foram irradiadas com laser de baixa intensidade de Arseneto de Gálio e Alumínio, λ=808nm, 200mW de potência nominal, densidade de potência de 200mW/cm2, dose de energia ou fluência de 37J/cm2, área de feixe de 0,02mm2, tempo de 5s, energia de 1J, em um ponto de aplicação, diariamente, durante 13 dias. Em seguida, foram realizadas contagens celulares e o RNA foi extraído, quantificado, submetido a síntese de cDNA e realizada quantificação de Ct comparativo pela técnica de reação em cadeia da polimerase em tempo real. Os valores foram submetidos à análise estatística pelo teste MannWhitney com p<0,05. A análise da contagem celular foi estatisticamente superior no grupo L (37,25x104±22,02) em relação ao grupo controle (22,75x104±7,660) com (p=0,0259) e os valores de 2ΔΔCt apresentaram para os genes S100A6, PMCA, calmodulina e FKBP4 hiper expressão no décimo terceiro dia, enquanto a osteocalcina apresentou hipo expressão e iNOS mantevese constante nos grupos L e C. Sugerese que o mecanismo de ação do laser de baixa intensidade é, possivelmente, dosedependente e acumulativo e estar relacionado às fases do ciclo celular em osteoblastos humanos.