O papel da dicer na diferenciação de adipócitos marrons in vivo
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Data
2017-05-30
Autores
Branquinho, Jessica Lais de Oliveira [UNIFESP]
Orientadores
Mori, Marcelo Alves da Silva [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Resumo
Objective: To generate dicer knockout mice in mesenchymal precursor cells expressing myogenic factor 5 (Myf5) and to evaluate the in brown adipose tissue function in mice. Methods:In addition to generating the constitutive knockout mice, we generated the tamoxifen inducible knockout model at different stages of the mouse development. In addition, we performed several experiments to evaluate the metabolic profile, tissue distribution and thermogenic function of brown adipose tissue.Results: Because Dicer knockout in Myf5 + precursor cells was shown to be lethal, the inducible model turned out to be the most suitable model to be studied. Tamoxifen injection in pregnant females proved to be harmful, leading to abortion, but with cesarean surgery it was possible to avoid that. Male mice that were injected with tamoxifen from the newborn stage (seven days of life) showed a strong tendency to exhibit some type of metabolic syndrome, such as insulin resistance, and increased subcutaneous adipose tissue mass. On the other hand, animals treated with tamoxifen before puberty (four weeks of life) showed no differences or trends in all parameters analyzed, regardless of whether male or female. However, knocking out Dicer in the adult period (three months of life) resulted in significant differences in thermogenesis and tissue distribution. Dicer knockout males showed a significant decrease in thermogenic function of brown adipose tissue when exposed to cold and females were able to maintain a higher temperature during chronic cold exposure, in addition to showing a decrease in the gastrocnemius muscle mass after cold. Both genders showed a significant increase in brown adipose tissue, liver and kidney mass after a period of chronic cold exposure, independent of the genotype. In addition, it was possible to verify changes in the histological pattern of adipose tissues in the knockout animals, whereas different in males and females. Conclusions: The lethality of the constitutive knockout model may be due to the fact that Dicer and microRNAs are very important for the development of cells, but the reasons that lead to non-viability are not clear. The inducible knockout model was shown to be effective in this study and differences in the knockout effects were found at different stages of animal development depending on the degree of tissue formation, the methodology of brown adipose tissue activation and the gender. This study may help the understanding of the development and formation of adipose xx tissue and the metabolic effects that lack of Dicer in mesenchymal precursor cells expressing Myf5 may cause. cause.
Objetivo: Gerar animais nocautes para Dicer em células mesenquimais precursoras que expressam o fator miogênico 5 (Myf5) e avaliar a resposta deste nocauteamento em adipócitos marrons em camundongos. Métodos: Além de gerar os animais nocautes para Dicer em células precursoras Myf5+ constitutivamente, geramos o modelo de nocauteamento induzível por tamoxifeno em diferentes fases do desenvolvimento do camundongo, além de realizar diversos experimentos para avaliar o perfil metabólico, distribuição dos tecidos e função termogênica do tecido adiposo marrom. Resultados: Pelo fato do nocauteamento de Dicer em células precursoras Myf5+ constitutivamente ter se mostrado letal, o modelo induzível tornou-se o melhor modelo para ser estudado. A injeção de tamoxifeno em fêmeas grávidas mostrou-se prejudicial, levando ao aborto, porém com cirurgia de cesária foi possível assegurar a vida dos embriões. Os camundongos machos que foram induzidos no período recém nascido (sete dias de vida) indicaram uma forte tendência à possuírem algum tipo de síndrome metabólica, como a resistência à insulina e aumento da massa de tecido adiposo branco do tipo subcutâneo. Em contra partida, os animais tratados com tamoxifeno no período jovem (quatro semanas de vida) não apresentaram nenhuma diferença ou tendência em todos os parâmetros analisados, independente do gênero (macho ou fêmea). Já os animais que foram nocauteados no período adulto (três meses de idade) apresentaram diferenças significativas em relação à termogênese e distribuição dos tecidos. Os machos nocautes demonstraram diminuição significativa quanto à função termogênica do tecido adiposo marrom quando expostos ao frio e as fêmeas nocautes demonstraram uma temperatura mais elevada durante a exposição ao frio crônico, além de uma diminuição no músculo gastrocnêmio após o frio. Ambos apresentaram um aumento significativo na massa do tecido adiposo marrom, fígado e rim após a exposição crônica ao frio, independente do genótipo. Além disso, foi possível verificar que o perfil histológico foi alterado nos animais nocaute, porém de maneira diferente em machos e fêmeas. Conclusões: A letalidade do modelo de nocauteamento constitutivo deve-se ao fato da Dicer e os microRNAs serem muito importantes para o desenvolvimento das células, mas ainda não se sabe ao certo os motivos que levam à inviabilidade. O modelo de nocauteamento induzível se xviii mostrou eficaz para esse estudo e pode-se ver que o efeito do nocauteamento da Dicer é diferente nas diversas fases do desenvolvimento animal, dependendo do grau de formação dos tecidos, da metodologia de ativação do tecido adiposo marrom e do gênero. Este estudo pode ajudar na compreensão do desenvolvimento e formação do tecido adiposo e dos efeitos metabólicos que a falta de Dicer em células mesenquimais precursoras que expressam Myf5 podem causar
Objetivo: Gerar animais nocautes para Dicer em células mesenquimais precursoras que expressam o fator miogênico 5 (Myf5) e avaliar a resposta deste nocauteamento em adipócitos marrons em camundongos. Métodos: Além de gerar os animais nocautes para Dicer em células precursoras Myf5+ constitutivamente, geramos o modelo de nocauteamento induzível por tamoxifeno em diferentes fases do desenvolvimento do camundongo, além de realizar diversos experimentos para avaliar o perfil metabólico, distribuição dos tecidos e função termogênica do tecido adiposo marrom. Resultados: Pelo fato do nocauteamento de Dicer em células precursoras Myf5+ constitutivamente ter se mostrado letal, o modelo induzível tornou-se o melhor modelo para ser estudado. A injeção de tamoxifeno em fêmeas grávidas mostrou-se prejudicial, levando ao aborto, porém com cirurgia de cesária foi possível assegurar a vida dos embriões. Os camundongos machos que foram induzidos no período recém nascido (sete dias de vida) indicaram uma forte tendência à possuírem algum tipo de síndrome metabólica, como a resistência à insulina e aumento da massa de tecido adiposo branco do tipo subcutâneo. Em contra partida, os animais tratados com tamoxifeno no período jovem (quatro semanas de vida) não apresentaram nenhuma diferença ou tendência em todos os parâmetros analisados, independente do gênero (macho ou fêmea). Já os animais que foram nocauteados no período adulto (três meses de idade) apresentaram diferenças significativas em relação à termogênese e distribuição dos tecidos. Os machos nocautes demonstraram diminuição significativa quanto à função termogênica do tecido adiposo marrom quando expostos ao frio e as fêmeas nocautes demonstraram uma temperatura mais elevada durante a exposição ao frio crônico, além de uma diminuição no músculo gastrocnêmio após o frio. Ambos apresentaram um aumento significativo na massa do tecido adiposo marrom, fígado e rim após a exposição crônica ao frio, independente do genótipo. Além disso, foi possível verificar que o perfil histológico foi alterado nos animais nocaute, porém de maneira diferente em machos e fêmeas. Conclusões: A letalidade do modelo de nocauteamento constitutivo deve-se ao fato da Dicer e os microRNAs serem muito importantes para o desenvolvimento das células, mas ainda não se sabe ao certo os motivos que levam à inviabilidade. O modelo de nocauteamento induzível se xviii mostrou eficaz para esse estudo e pode-se ver que o efeito do nocauteamento da Dicer é diferente nas diversas fases do desenvolvimento animal, dependendo do grau de formação dos tecidos, da metodologia de ativação do tecido adiposo marrom e do gênero. Este estudo pode ajudar na compreensão do desenvolvimento e formação do tecido adiposo e dos efeitos metabólicos que a falta de Dicer em células mesenquimais precursoras que expressam Myf5 podem causar