Associação de anticorpos leucocitários em indivíduos com aloimunização eritrocitária
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Date
2017-12-21
Authors
Martins, Juliana Oliveira [UNIFESP]
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Bordin, José Orlando [UNIFESP]
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Dissertação de mestrado
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Abstract
Background: Leukocyte antibodies against HLA class I, class II and human neutrophil antigens (HNA) are formed from exposure to these antigens by transfusion, pregnancy or transplant, and may be associated with transfusion-related acute lung injury (TRALI) and immune neutropenias. Risk factors for acquisition of leukocyte antibodies are yet to be determined and present great importance for the prevention of severe and fatal transfusion reactions. Aims: To compare the prevalence of leukocyte antibodies in women with or without red blood cell (RBC) alloimmunization. Methods: This transversal study included women whose only stimulus to alloimmunization was pregnancy, with no transfusion history. We analyzed 147 blood samples from women with RBC alloimmunization, confirmed by the investigation and identification of RBC antibodies by the DG Gel-Card technique (Grifols-Spain). The control group consisted of 563 blood donors women with pregnancy history but without RBC alloimmunization. The identification of leukocyte antibodies was performed by: 1) granulocyte agglutination test (GAT), 2) white cell immunofluorescence test (Flow-WIFT), both tests using a panel of neutrophils obtained from three donors with previous HNA genotyping, and 3) bead-based assay - LABScreen Multi (LSM) (One Lambda), capable of detecting antibodies against HNA-1a, -1b, -1c, -2, -3a, -3b, -4a, -5a, -5b and HLA class I and II antigens. The identified HNA antibodies were confirmed by genotyping the corresponding antigen. Results: In the cohort of women with RBC alloimmunization we found 178 RBC antibodies: anti-D (anti-Lea (25.3%), anti-D (24.7%), anti-C (9.0%), anti-E (9.0%), anti-K (5.6%) and other antibodies (26.4%). We identified 74/147 (50.3%) samples with anti-HLA antibodies and 11/147 (7.5%) samples with anti-HNA antibodies with the following specificities: 5/11 anti-HNA-1a, 2/11 anti-FCRɣIIIb and 4/11 anti-HNA-3b. In the control group, we found 238/563 (42.3%) samples with anti-HLA and 24/563 (4.3%) samples with anti-HNA: 8/24 anti-HNA-1a, 1/24 anti-HNA-1c, 3/24 anti-HNA-2, 2/24 anti-HNA-3a, 5/24 anti-HNA-3b, 3/24 anti-HNA-5a and 2/24 anti-HNA-5b. Regarding the gestational history, 82/147 (55.8%) women in the group with RBC alloimmunization and 493/563 (87.6%) in control group had two or more pregnancies. The statistical analysis was performed in total samples, regardless the number of pregnancies, however no significant difference was observed in the prevalence rate of anti-HNA and anti-HLA between the two groups (p=0.10 and p=0.07, respectively). When the analysis was stratified including only multiparous women (two or more pregnancies) the prevalence of HNA alloimmunization was statistically significant in the group of women with RBC alloimmunization: 9/82 (11%) versus 23/493 (4.7%) blood donors, p=0.02, OR=2.52 (95% CI=1.15-3.79). Similarly a higher prevalence of HLA antibodies in the group of multiparous women with RBC alloimmunization was also observed: 51/82 (62.2%) versus 224/493 (45.4%), p=0.004, OR=1.97 (95% CI=1.18-2.71). Conclusions: The data show that RBC alloimmunization was significantly associated with the development of antibodies against leukocytes (anti-HNA and anti-HLA). A higher frequency of HNA alloimmunization (11%) observed in the group of multiparous women with RBC alloimmunization compared to the control group (4.7%), suggest that they are better immune responders and that they react strongly to allogeneic exposure. Anti-HLA antibodies have often been found in plasma in southeastern Brazil female blood donors (42.3%), and are statistically associated with the number of pregnancy (p<0.001).
Introdução: Anticorpos leucocitários contra HLA classe I, classe II e antígenos de neutrófilos humanos (HNA) são formados por exposição a esses antígenos por meio de transfusão sanguínea, gravidez ou transplante e podem estar associados à lesão pulmonar aguda relacionada à transfusão (TRALI) e neutropenias imunes. Os fatores de risco para a aquisição dos anticorpos leucocitários não são totalmente compreendidos, entretanto apresentam grande importância para a prevenção de reações transfusionais graves e fatais. Objetivos: Comparar a prevalência de anticorpos leucocitários em mulheres com ou sem aloimunização eritrocitária. Determinar a frequência e a especificidade de anticorpos leucocitários. Métodos: Trata-se de um estudo transversal que incluiu mulheres cujo único estímulo à aloimunização foi a gestação, ou seja, sem histórico transfusional. Foram analisadas 147 amostras de sangue de mulheres com aloimunização eritrocitária. Os anticorpos eritrocitários foram investigados e identificados pela técnica DG Gel-Card (Grifols-Spain). O grupo de controle foi composto por 563 mulheres doadoras de sangue com história de gestação, mas sem aloimunização eritrocitária. A identificação dos anticorpos leucocitários foi realizada por: 1) teste de aglutinação de granulócitos (GAT), 2) teste de imunofluorescência de células brancas (Flow-WIFT), ambos testes foram realizados usando um painel de neutrófilos obtidos a partir de três doadores com genótipos conhecidos de HNA e 3) ensaio com bead-based - LABScreen Multi (LSM) (One Lambda), capaz de detectar anticorpos contra antígenos HNA-1a, -1b, -1c, -2, -3a, -3b, -4a, -5a, -5b e HLA classe I e II. Os anticorpos anti-HNA identificados foram confirmados por genotipagem do antígeno correspondente. Resultados: Na coorte de mulheres com aloimunização eritrocitária, encontramos 178 anticorpos eritrocitários: anti-Lea (25,3%), anti-D (24,7%), anti-C (9,0%), anti-E (9,0%), anti-K (5,6%) e outros anticorpos (26,4%). Foram identificamos 74/147 (50,3%) amostras com anticorpos anti-HLA e 11/147 (7,5%) amostras com anticorpos anti-HNA com as seguintes especificidades: 5/11 anti-HNA-1a, 2/11 anti-FcɣRIIIb e 4/11 anti-HNA-3b. No grupo controle, encontramos 238/563 (42,3%) amostras com anti-HLA e 24/563 (4,3%) com anti-HNA: 8/24 anti-HNA-1a, 1/24 anti-HNA-1c , 3/24 anti-HNA-2, 2/24 anti-HNA-3a, 5/24 anti-HNA-3b, 3/24 anti-HNA-5a e 2/24 anti-HNA-5b. Em relação ao histórico gestacional, 82/147 (55,8%) mulheres no grupo com aloimunização eritrocitária e 493/563 (87,6%) no grupo controle tiveram duas ou mais gestações. A análise estatística foi realizada em todas as amostras, independentemente do número de gestações, porém nenhuma diferença significativa foi observada na taxa de prevalência de anticorpos anti-HNA e anti-HLA entre os dois grupos (p=0,10 e p=0,07, respectivamente). Quando a análise foi estratificada, incluindo apenas mulheres multíparas (duas ou mais gestações), a prevalência de aloimunização HNA foi significativamente maior no grupo de mulheres com aloimunização eritrocitaria: 9/82 (11%) versus 23/493 (4,7%), p=0,02, OR=2,52 (IC 95%=1,15-3,79). Do mesmo modo, observou-se também uma maior prevalência de anticorpos HLA no grupo das mulheres multíparas com aloimunização eritrocitária: 51/82 (62,2%) versus 224/493 (45,4%), p=0,004, OR = 1,97 (IC 95%=1,18- 2.71). Conclusões: Os dados mostram que a aloimunização eritrocitária foi significativamente associada ao desenvolvimento de anticorpos leucocitários (anti-HNA e anti-HLA). Uma maior frequência de aloimunização neutrofílica (11%) foi observada no grupo das mulheres multíparas com aloimunização eritrocitária em relação ao grupo controle (4,7%), sugerindo que mulheres com anticorpos eritrocitários são melhores respondoras imunológicas e que reagem fortemente à exposição alogênica. Anticorpos anti-HLA são encontrados no plasma de doadoras de sangue do sudeste brasileiro (42,3%) em uma frequência maior que a observada em caucasoides, e se correlacionam estatisticamente com o maior número de gestações.
Introdução: Anticorpos leucocitários contra HLA classe I, classe II e antígenos de neutrófilos humanos (HNA) são formados por exposição a esses antígenos por meio de transfusão sanguínea, gravidez ou transplante e podem estar associados à lesão pulmonar aguda relacionada à transfusão (TRALI) e neutropenias imunes. Os fatores de risco para a aquisição dos anticorpos leucocitários não são totalmente compreendidos, entretanto apresentam grande importância para a prevenção de reações transfusionais graves e fatais. Objetivos: Comparar a prevalência de anticorpos leucocitários em mulheres com ou sem aloimunização eritrocitária. Determinar a frequência e a especificidade de anticorpos leucocitários. Métodos: Trata-se de um estudo transversal que incluiu mulheres cujo único estímulo à aloimunização foi a gestação, ou seja, sem histórico transfusional. Foram analisadas 147 amostras de sangue de mulheres com aloimunização eritrocitária. Os anticorpos eritrocitários foram investigados e identificados pela técnica DG Gel-Card (Grifols-Spain). O grupo de controle foi composto por 563 mulheres doadoras de sangue com história de gestação, mas sem aloimunização eritrocitária. A identificação dos anticorpos leucocitários foi realizada por: 1) teste de aglutinação de granulócitos (GAT), 2) teste de imunofluorescência de células brancas (Flow-WIFT), ambos testes foram realizados usando um painel de neutrófilos obtidos a partir de três doadores com genótipos conhecidos de HNA e 3) ensaio com bead-based - LABScreen Multi (LSM) (One Lambda), capaz de detectar anticorpos contra antígenos HNA-1a, -1b, -1c, -2, -3a, -3b, -4a, -5a, -5b e HLA classe I e II. Os anticorpos anti-HNA identificados foram confirmados por genotipagem do antígeno correspondente. Resultados: Na coorte de mulheres com aloimunização eritrocitária, encontramos 178 anticorpos eritrocitários: anti-Lea (25,3%), anti-D (24,7%), anti-C (9,0%), anti-E (9,0%), anti-K (5,6%) e outros anticorpos (26,4%). Foram identificamos 74/147 (50,3%) amostras com anticorpos anti-HLA e 11/147 (7,5%) amostras com anticorpos anti-HNA com as seguintes especificidades: 5/11 anti-HNA-1a, 2/11 anti-FcɣRIIIb e 4/11 anti-HNA-3b. No grupo controle, encontramos 238/563 (42,3%) amostras com anti-HLA e 24/563 (4,3%) com anti-HNA: 8/24 anti-HNA-1a, 1/24 anti-HNA-1c , 3/24 anti-HNA-2, 2/24 anti-HNA-3a, 5/24 anti-HNA-3b, 3/24 anti-HNA-5a e 2/24 anti-HNA-5b. Em relação ao histórico gestacional, 82/147 (55,8%) mulheres no grupo com aloimunização eritrocitária e 493/563 (87,6%) no grupo controle tiveram duas ou mais gestações. A análise estatística foi realizada em todas as amostras, independentemente do número de gestações, porém nenhuma diferença significativa foi observada na taxa de prevalência de anticorpos anti-HNA e anti-HLA entre os dois grupos (p=0,10 e p=0,07, respectivamente). Quando a análise foi estratificada, incluindo apenas mulheres multíparas (duas ou mais gestações), a prevalência de aloimunização HNA foi significativamente maior no grupo de mulheres com aloimunização eritrocitaria: 9/82 (11%) versus 23/493 (4,7%), p=0,02, OR=2,52 (IC 95%=1,15-3,79). Do mesmo modo, observou-se também uma maior prevalência de anticorpos HLA no grupo das mulheres multíparas com aloimunização eritrocitária: 51/82 (62,2%) versus 224/493 (45,4%), p=0,004, OR = 1,97 (IC 95%=1,18- 2.71). Conclusões: Os dados mostram que a aloimunização eritrocitária foi significativamente associada ao desenvolvimento de anticorpos leucocitários (anti-HNA e anti-HLA). Uma maior frequência de aloimunização neutrofílica (11%) foi observada no grupo das mulheres multíparas com aloimunização eritrocitária em relação ao grupo controle (4,7%), sugerindo que mulheres com anticorpos eritrocitários são melhores respondoras imunológicas e que reagem fortemente à exposição alogênica. Anticorpos anti-HLA são encontrados no plasma de doadoras de sangue do sudeste brasileiro (42,3%) em uma frequência maior que a observada em caucasoides, e se correlacionam estatisticamente com o maior número de gestações.