Mapeamento de dominios funcionais da molecula de surperficie GP82 de formas metaciclicas de Trypanosoma cruzi
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Date
2001
Authors
Manque, Patricio Andres Manque [UNIFESP]
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Tese de doutorado
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Abstract
A glicoproteina de superficie gp82, expressa nas formas netaciclicas de Trypanosoma cruzi, tem sido implicada no processo de invasao celular. Neste trabalho, caracterizamos o sitio de adesao da gp82 a celula hospedeira usando proteinas recombinantes e peptideos sinteticos baseados na gp82. A proteina recombinante Del-4/8, em que 65 aminoacidos do dominio central da gp82 foram deletados (posicoes 257 a 321), virtualmente perdeu a capacidade de se ligar a celula e de inibir a invasao do parasita, em contraste com J18, o construcao que contem a sequencia completa da gp82 (aminoacidos 1 a 516). Construcoes com delecoes menores, por exemplo, Del-4 (posicao 257 a 271) e Del-8 (posicao 293 a 321), ligam-se a celula hospedeira em grau menor do que Jl8. Os sitios deletados nas proteinas recombinantes Del-4 e Del-8 contem aminoacidos acidos criticos para adesao celular. Assim, a capacidade de ligar-se a celula da proteina Del-E/D, sem os pares de acido glutamico (259/260) e de acido aspartico (303/304), foi minima, assim como a sua capacidade de inibir a internalizacao do parasita. De um conjunto de peptideos sinteticos cobrindo o dominio central da gp82, um peptideo hibrido de 22 residuos, p4/8, formado por duas sequencias de nao contiguas (osicoes 257 a 273 e 302 a 306) e que contem os quatro residuos acidicos, competiu com a ligacao da proteina Jl8 a celula hospedeira e inibiu significativamente (60 por cento) a penetracao de parasitas. Este peptideo, gerado por justaposicao de sequencias que estao separadas por uma sequencia hidrofobica na molecula linear, parece estar mimetizando o sitio de ligacao na celula da gp82 que seria conformaacao dependente. Os experimentos de competicao de anticorpos com um conjunto de peptideos residuos superpostos identificaram o epitopo para o anticorpo monoclonal 3F6, o anticorpo monoclonal dirigido contra a gp82 que inibe a invasao celular, como a sequencia representada pelo peptideo p3 (244 a 263), que tem superposicao parcial com o sitio de adesao a celula
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São Paulo: [s.n.], 2001. 91 p. ilus.