Mapeamento de dominios funcionais da molecula de surperficie GP82 de formas metaciclicas de Trypanosoma cruzi

Mapeamento de dominios funcionais da molecula de surperficie GP82 de formas metaciclicas de Trypanosoma cruzi

Título alternativo Mapping of the functional domains of Trypanosoma cruzi metacyclic stage surface protein molecule GP82
Autor Manque, Patricio Andres Manque Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo A glicoproteina de superficie gp82, expressa nas formas netaciclicas de Trypanosoma cruzi, tem sido implicada no processo de invasao celular. Neste trabalho, caracterizamos o sitio de adesao da gp82 a celula hospedeira usando proteinas recombinantes e peptideos sinteticos baseados na gp82. A proteina recombinante Del-4/8, em que 65 aminoacidos do dominio central da gp82 foram deletados (posicoes 257 a 321), virtualmente perdeu a capacidade de se ligar a celula e de inibir a invasao do parasita, em contraste com J18, o construcao que contem a sequencia completa da gp82 (aminoacidos 1 a 516). Construcoes com delecoes menores, por exemplo, Del-4 (posicao 257 a 271) e Del-8 (posicao 293 a 321), ligam-se a celula hospedeira em grau menor do que Jl8. Os sitios deletados nas proteinas recombinantes Del-4 e Del-8 contem aminoacidos acidos criticos para adesao celular. Assim, a capacidade de ligar-se a celula da proteina Del-E/D, sem os pares de acido glutamico (259/260) e de acido aspartico (303/304), foi minima, assim como a sua capacidade de inibir a internalizacao do parasita. De um conjunto de peptideos sinteticos cobrindo o dominio central da gp82, um peptideo hibrido de 22 residuos, p4/8, formado por duas sequencias de nao contiguas (osicoes 257 a 273 e 302 a 306) e que contem os quatro residuos acidicos, competiu com a ligacao da proteina Jl8 a celula hospedeira e inibiu significativamente (60 por cento) a penetracao de parasitas. Este peptideo, gerado por justaposicao de sequencias que estao separadas por uma sequencia hidrofobica na molecula linear, parece estar mimetizando o sitio de ligacao na celula da gp82 que seria conformaacao dependente. Os experimentos de competicao de anticorpos com um conjunto de peptideos residuos superpostos identificaram o epitopo para o anticorpo monoclonal 3F6, o anticorpo monoclonal dirigido contra a gp82 que inibe a invasao celular, como a sequencia representada pelo peptideo p3 (244 a 263), que tem superposicao parcial com o sitio de adesao a celula
Palavra-chave Trypanosoma cruzi
Glicoproteínas de Membrana
Idioma Português
Data de publicação 2001
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2001. 91 p. ilus.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 91 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/17161

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