Inibidores do tipo kunitz das sementes baihinia bauhinioides e bauhinia rufa: ação sobre elastases de catepsina G
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Data
2000
Autores
Oliveira, Cleide de [UNIFESP]
Orientadores
Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
O inibidor de elastases isolado das sementes de Bauhinia bauhinoides, e denominado BbEI, foi purificado por cromatografia de troca-ionica em resina DEAE-Sephadex, seguida por cromatografia de afinidade em resina tripsinaSepharose, sendo o material nao retido cromatografado em coluna de trocaionica HiTrap Q, e posteriormente em coluna de fase reversa C4- A estrutura primaria do inibidor mostra homologia com inibidores vegetais da familia do tipo Kunitz, entretanto, o BbEI nao contem nenhum residuo Cys, Os inibidores vegetais do tipo Kunitz apresentam como caracteristicas estruturais de 160 a 180 residuos de aminoacidos, e normalmente contem quatro residuos Cys que formam duas pontes dissulfeto. O BbEI apresenta massa molecular de 18.034 Da. O sitio reativo do BbEI foi determinado experimentalmente compreendendo a sequencia R57FETPLAIHIITEW69, e o residuo Ala 63 esta na posicao Pl. Dois outros inibidores de elastases, o BrEl-l e o BrEl-ll, foram purificados das sementes de Bauhinia rufa, apresentando tambem homologia com os membros da familia Kunitz, como observado atraves da determinacao das suas sequencias parciais. O inibidor BrEI-II e bem distinto dos demais pela presenca da sequencia RGD na porcao N-terminal da molecula. O papel da sequencia RGD deste inibidor na adesao celular merece ser investigado. Baseado na sequencia do sitio reativo do BbEI, substratos peptidicos de fluorescencia apagada foram sintetizados, e os parametros cineticos da hidrolise da Ala no sitio de clivagem foram determinados para a (PPE). O peptideo substrato de fluorescencia apagada, o Abz-FETPLAIHIITEQEDDnp, foi hidrolisado por PPE com baixo valor de Km e alta efiCiência catalitica (kcat/km=6,8 x l0 4 M-1.seg-1), um valor 10 vezes mais alto comparado com a hidrolise do substrato MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNan por PPE
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2000. 108 p. ilustabgraf.