Navegando por Palavras-chave "Proteólise"

Agora exibindo 1 - 2 de 2
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Efeitos da restrição calórica sobre o proteassomo de leveduras Saccharomyces cerevisiae
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-05-25) Bicev, Renata Naporano [UNIFESP]; Cunha, Fernanda Marques da [UNIFESP]; Demasi, Marilene; http://lattes.cnpq.br/0774104601063155; http://lattes.cnpq.br/4457893486819547; http://lattes.cnpq.br/2891732097039776
    Objetivo: Investigar os efeitos da restrição calórica sobre as modificações pós-traducionais e conformação espacial do proteassomo 20S de Saccharomyces cerevisiae. Métodos: O proteassomo 20S foi purificado de células de Saccharomyces cerevisiae cultivadas por 7,5 h em meio YP suplementado com: 2% de glicose (condição controle) e 0,5% de glicose (restrição calórica). A purificação foi realizada por uma etapa de cromatografia de afinidade a níquel seguida de uma cromatografia de troca aniônica. A atividade do proteassomo foi estudada por método fluorimétrico. Para explorar as modificações pós-traducionais, o proteassomo 20S foi submetido a eletroforese bidimensional e espectrometria de massas. Para avaliar sua conformação espacial e estrutura, foram empregados microscopia eletrônica de transmissão, espalhamento de raios X a baixos ângulos e dicroísmo circular. Resultados: O proteassomo isolado de células caloricamente restritas tem maior atividade dos tipos quimiotripsina e tripsina, além de ser mais capaz de degradar a proteína β-caseína, quando comparado ao grupo controle. Pela análise por espectrometria de massas, observou-se que a restrição calórica induz fosforilação da treonina 55 ou serina 56 da subunidade α5 do proteassomo 20S. Modelagens in silico indicaram que a fosforilação de um desses resíduos aumentam a interação entre a proteína α-sinucleína e o anel α do proteassomo 20S. Os resultados dos experimentos de microscopia eletrônica de transmissão, espalhamento de raios X a baixos ângulos e dicroísmo circular não revelaram diferenças entres os grupos analisados. Conclusões: A restrição calórica aumenta a capacidade do proteassomo de degradar substratos modelo e proteínas inteiras. Além disso, induz uma modificação pós-traducional em ao menos um resíduo da subunidade α5 do proteassomo 20S que pode estar associada à sua maior capacidade proteolítica. Ainda que esses resultados possam estar associados a mudanças estruturais do proteassomo, não foi possível observar diferenças nesse contexto usando as técnicas apresentadas.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Novo sistema in situ para análise da proteólise muscular esquelética: papel da via do AMP cíclico
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-10-27) Bergantin, Leandro Bueno [UNIFESP]; Godinho, Rosely Oliveira [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    In vertebrates, skeletal muscle contributes to the control of body energy homeostasis by providing amino acids generated from protein breakdown. However, continued muscle protein breakdown results in muscle atrophy, such as those associated with aging, muscle wasting or neuromuscular dysfunction. The molecular mechanisms involved in regulation of muscle proteolysis as well as the pharmacological screening of drugs that interfere in this process have been addresses by measurement of tyrosine release from muscles of prepubertal rats, because they are thin enough to allow an adequate diffusion of oxygen and substrates under in vitro conditions. Therefore, the effect of aging or neurodegenerative diseases has been analyzed only with static markers, as atrogin-1/MAFbx or Murf-1. The aim of the present study was the establishment of a new in situ experimental model for the dynamic measurement of proteolysis in adult rat muscles, by quantifying the release of tyrosine from the lumbricalis muscle. In addition, the fluorimetric macromethod for tyrosine measurement was adapted for 96 wells microplate, which resulted in 90% reduction in the formation of toxic chemical waste. The results were complemented by analyzing the effect of modulators of Gs protein / adenylyl cyclase / cyclic AMP signaling pathway on proteolysis of adult muscles, whose influence had already been demonstrated in muscles from prepubertal rat. Using adult rat lumbricalis muscle, we found that modulators of the cAMP signaling pathway inhibit muscle proteolysis under basal or catabolic condition induced by denervation. â-adrenergic agonists isoproterenol (30-100 mM; non-selective) and formoterol (1-10 nM; selective â2), the adenylyl cyclase activator forskolin (30-100 nM) and nonselective phosphodiesterase inhibitor IBMX (100-1000 mM) reduced by 12% to 20% muscle proteolysis. Furthermore, our results show that muscle proteolysis in pre-pubertal rats (30 days old) is 94% higher than in adult animals, which makes questionable the direct extrapolation of results obtained from pre-pubertal muscles to adult or senile muscles. The use of lumbricalis muscle as an proteolysis experimental model reduces by 75% the number of animals in proteolysis experimental protocols and by 90% the amount of chemical waste produced, due to the adjustment of the dosage of tyrosine to 96 well microplate, optimizing the pharmacological screening of drugs for anticatabolic purposes.