Navegando por Palavras-chave "NADPH Oxidase"

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    Avaliacao em aorta toracica do papel da NAPH Oxidase e do desacoplamento da eNOS na disfuncao endotelial induzida pela desnutricao intra-uterina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Ponzio, Beatriz Felice [UNIFESP]
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    Caracterização da TCCYP19 e o estudo do seu papel durante a infecção celular causada pelo Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-12-18) Santos, Gregory Pedroso Dos [UNIFESP]; Schenkman, Sergio [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    Chagas disease caused by the protozoan parasite Trypanosoma cruzi is characterized by an extensive inflammatory process in the organs and sites most affected by the infection. To understand the evasion mechanisms developed by the parasite in response to attempts to control the infection by the host organism - several studies have being published describing an intriguing relationship between reactive oxygen species (ROS) produced by infected cells, and their ability to induce or increase in the proliferation of T. cruzi. So far, the mechanisms involved in these processes are still unknown. However, these studies suggested that parasites have developed a mechanism to deal with oxidative stress, which nullifies the antimicrobial capacity, or which is capable of converting these oxidative environments to their benefit. In this thesis, we studied a chaperone of 19 kDa, expressed by T. cruzi, entitled cyclophilin 19 (TcCyp19), that has high similarity to cyclophilin A (CypA), expressed by mammals. CypA acts in the activation of the cellular immune and inflammatory response, as well as in the translocation of the p47phox subunit - responsible for activation of the NADPH oxidase enzyme complex, which leads to the production reactive oxygen species. We found that TcCyp19 is expressed in all T. cruzi stages, being more abundant in the epimastigote form of the parasite. Through adaptations carried out by genetic engineering, we have generated parasites capable of expressing TcCyp19 fused to a HA tag. This approach allowed us to detect its secretion by the intracellular amastigote form in the cytosol of the host cell . Furthermore, we observed that modulations in the expression of TcCyp19, both in the parasite and through the expression carried out directly in the host cell, increased the intracellular multiplication capacity of the parasite concomitant with TcCyp19 release in the cytosol of infected cells. We also noticed a parallel increase in the production of ROS, during infections and when rat myoblast L6 cells expressed TcCyp19. In contrast, parasites depleted of TcCyp19 gene showed a substantial reduction in the intracellular amastigotes proliferation, similar to what was observed for wild type parasites treated with antioxidant enzymes or with a cyclosporine A (a specific inhibitor of cyclophilins). The knockout parasites also generated a significant reduction in the production of ROS in infected cells. Both reduced proliferation and low ROS production were reestablished by the add-back parasites or when infecting L6 cells that express the TcCyp19. Mechanistically, the production of ROS generated by TcCyp19 appears to be related to the activation of the NADPH oxidase by the translocation of the p47phox subunit to the cell surface as previously found for CypA. In fact, part of the TcCyp19 colocalize of stretches of p47phox aligned with microfilaments in L6 cells and concentrate in the leading edges of the cells in regions proposed to contain active NADPH oxidase. We conclude that TcCyp19 is a key molecule responsible for inducing increased production of ROS, which in turn can influence proliferation of parasites and guarantee the prevalence of infection.
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    Expressão de receptor B1 de bradicinina, NADPH oxidase e HSP90 em células endoteliais sob tratamento oxidante e em camundongos nocautes hipertensos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Azevedo, Aline de Cassia [UNIFESP]; Santos, Oscar Fernando Pavão dos [UNIFESP]
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    Acesso aberto (Open Access)
    Insuficiência renal crônica, restrição de sono e sildenafil: consequências renais, cardíacas e sexuais em um modelo animal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Hirotsu, Camila [UNIFESP]; Andersen, Monica Levy [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A insufiCiência renal cronica (IRC) e uma doenca de elevada morbidade e mortalidade, que requer tratamento de alto custo e possui grande impacto na qualidade de vida. Ao longo de sua progressao, e frequente o aparecimento dos disturbios de sono, os quais tem sido associados a uma menor chance de sobrevida nessa populacao. Devido a exposicao a situacoes estressoras como a dialise, a permanencia constante em ambiente hospitalar e a alta prevalencia de disturbios de sono, a restricao de sono constitui outro fator inerente ao cotidiano do paciente com IRC. Sabe-se, porem, que o sono exerce funcoes essenciais na restauracao e manutencao da homeostasia corporal, sugerindo um possivel papel da falta de sono no avanco da IRC. Assim, um tratamento alternativo que pudesse prevenir ou tratar as possiveis complicacoes decorrentes da falta de sono, melhorando a evolucao da doenca seria um avanco de grande relevancia. Nesse sentido, ressalta-se o uso do sildenafil, o qual tem apresentado efeitos beneficos no sistema renal, cardiovascular e sexual. Portanto, o presente estudo teve como objetivo investigar o papel do sono e do sildenafil na progressao da IRC por meio de duas investigacoes: 1) Estudo do padrao de sono na evolucao da IRC; 2) Avaliacao dos efeitos do sildenafil e da restricao de sono na progressao da IRC. Em relacao ao primeiro estudo, os resultados revelaram que animais com IRC apos oito semanas apresentaram um sono fragmentado e com inversao do ciclo vigilia-sono, que compensou sua necessidade homeostatica. No entanto, com 12 semanas de IRC, observou-se reducao do tempo total de sono e do sono paradoxal, alem do elevado numero de despertares. Em geral, a perda da funcao renal e o aumento da pressao arterial sistolica foram considerados fatores preditores independentes da piora na qualidade do sono. Em relacao ao segundo estudo, observou-se que o tratamento com sildenafil foi capaz de reduzir a proteinuria e as alteracoes da morfologia renal, aumentando o clearance de creatinina e evitando o desenvolvimento da hipertensao, a perda excessiva de peso, o hipogonadismo, a disfuncao eretil, a dislipidemia e o aumento de citocinas pro-inflamatorias. Entretanto, frente a restricao de sono esses efeitos beneficos foram atenuados, com excecao da melhora no desempenho sexual. Houve tambem um aumento da sobrevida induzido pelo tratamento com sildenafil, o qual em 75% o risco de mortalidade. No coracao, a expressao genica de eNOS e ECA2 aumentaram seletivamente nos animais IRC nao-restritos de sono, explicando em parte a reducao da hipertensao nesse grupo. Porem, um aumento da expressao cardiaca de NOX2 associado a elevados niveis de aldosterona foi encontrado no grupo IRC tratado com sildenafil e restrito de sono, o qual tambem apresentou aumento significativo da frequencia cardiaca. No rim, observou-se aumento na expressao de NOX2 e reducao de NOX4 e DDAH1 nos animais IRC comparados aos controles, independente do tratamento e da restricao de sono. A expressao de eNOS, no entanto, foi maior no grupo IRC tratado com sildenafil e naorestrito de sono. No testiculo, a restricao de sono elevou a expressao de eNOS, explicando em parte a melhora no comportamento sexual. Alem disso, uma reducao na expressao genica de DDAH1 e ECA2 foi identificada apenas no grupo IRC tratado com veiculo em comparacao aos demais grupos. No corpo cavernoso, a expressao de NOX2 foi reduzida pelo tratamento com sildenafil nos animais IRC, independente da restricao de sono, enquanto o aumento na expressao de eNOS e ECA2 foi observado apenas no grupo IRC tratado com sildenafil e nao-restrito de sono. Apos a restricao de sono, um aumento da expressao de iNOS foi observado apenas no grupo IRC tratado com veiculo. Em conclusao, o presente estudo mostrou que tanto as alteracoes na arquitetura do sono como a reducao no tempo de sono estao relacionadas a um maior avanco da IRC de maneira bidirecional. Alem disso, o tratamento com sildenafil apresentou beneficios na IRC, principalmente quando nao associado a restricao de sono, pois retarda o avanco da doenca e evita o desenvolvimento da hipertensao e da disfuncao eretil por meio de alteracoes mediadas em parte pela reducao da expressao de NOX2 e aumento de NOS, DDAH1 e ECA2 em multiplos orgaos. Apesar disso, um possivel efeito cardiotoxico deve ser mais bem investigado. Em suma, este trabalho sugere que para um melhor tratamento e evolucao da IRC se faz necessaria uma boa qualidade e quantidade adequada de sono