Navegando por Palavras-chave "Global methylation"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Mecanismos envolvidos no atenuamento da inflamação pulmonar alérgica em ratos com baixo peso ao nascer
    (Universidade Federal de São Paulo, 2018-02-26) Ramos, Ana Paula Almeida [UNIFESP]; Landgraf, Maristella de Almeida Vitta [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Food restriction during the gestational period leads to changes in the pattern of fetal growth and development. In previous studies, our group demonstrated that intrauterine malnutrition caused elevated levels of basal corticosterone and reduced allergic lung inflammatory response in Wistar rats. Based on these findings, the present study aimed to evaluate mechanisms involved in the attenuation of the allergic pulmonary inflammatory response, such as the role of corticosterone and epigenetic alterations. Male Wistar rats, with low birth weight (LBW), from malnourished females during the whole gestational period, with 9 weeks of age were sensitized and challenged with ovalbumin. Allergic pulmonary response was studied in these animals at 12 weeks of age. The characterization of the inflammatory response was analyzed by analysis of the cellular infiltrate in the bronchoalveolar lavage and histological section of the peribronchial region, where we verified a lower cellular infiltrate in the LBW lungs. The quantification of IgE, cytokines, ACTH and CORT was performed by multiplex assay and quantification of CBG, PGE2 and DNMT1 by Kit EIA. Gene expression of 11βHSD1, 11β-HSD2, COX-1, COX-2, GR and RUNX3 was evaluated by RT-PCR Real Time, while the protein expression of COX-1, COX-2 and GR was evaluated by Western blotting. Global DNA methylation quantified by Methylamp global DNA methylation. LBW rats sensitized and challenged with ovalbumin (OVA/OVA) demonstrated lower serum IgE levels than normal birth weight (NBW) rats OVA/OVA. It was observed an imbalance in cytokines production, in LBW rats: elevated basal levels of IL-4 and IL-10 with consequent failure to increase these cytokines after stimulation with OVA; failure to raise levels of IL-5 and IL-6 and lower IL-13 levels after OVA challenge, in addition to higher levels of IL-1β, TNF-α and IFN-γ. PGE2 levels were lower in LBW OVA/OVA rats than NBW OVA/OVA rats. LBW OVA/OVA rats failed to increase the gene and protein expression of the COX-1 and COX-2 enzymes. LBW rats presented high basal levels of CORT and failed to increase these levels after challenge with OVA, different from that observed in NBW OVA/OVA rats. On the other hand, the challenge with OVA did not modify ACTH levels in LBW rats, whereas in NBW OVA/OVA rats it caused reduction. After stimulation with OVA, only NBW rats demonstrated a reduction in GR expression; the expression of 11β-HSD2 did not differ when compared LBW vs. NBW groups, and the LBW OVA/OVA vs. NBW OVA/OVA groups, but LBW group failed to increase 11β-HSD2 expression after OVA stimulation.There was no difference in CBG levels among different groups. Global methylation levels as well as DNMT1 enzyme levels were significantly higher in LBW OVA/PBS rats compared to NBW OVA/PBS; only LBW OVA/OVA rats decreased the concentration of DNMT1. The RUNX3 gene expression did not differ when compared LBW vs. NBW groups and the LBW OVA/OVA vs. NBW OVA/OVA groups. Considering these results, we propose that the failure in corticosterone regulation and the imbalance in the production of inflammatory mediators, together with DNA hypermethylation in lung tissue could be involved in the attenuation of the allergic inflammatory response presented by LBW rats.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Resposta inflamatória pulmonar induzida por LPS na geração F2 de ratos desnutridos intrauterinamente
    (Universidade Federal de São Paulo, 2019) Rodrigues, Larissa Gonçalves Aguiar [UNIFESP]; Landgraf, Richardt Gama [UNIFESP]; Landgraf, Maristella de Almeida Vitta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0918820835437686; http://lattes.cnpq.br/9656990228494629; http://lattes.cnpq.br/7346732952059772
    A restrição alimentar global durante todo o período gestacional provoca alterações no crescimento do feto e prejudica na sua resposta imunológica pós natal. Em trabalhos anteriores do nosso grupo foi observado redução da resposta inflamatória, indicando que a deficiência materna em nutrientes acarreta em alterações no metabolismo e sistema imunológico do feto na vida adulta. O presente trabalho teve como objetivo avaliar os possíveis mecanismos envolvidos na redução da resposta inflamatória pulmonar induzida por LPS na geração F2 de ratos desnutridos intrauterinamente, com 12 semanas de idade. Foram utilizados ratos machos Wistar com peso normal ao nascer (PNN), provenientes de mães que receberam dieta ad libitum na gestação e com baixo peso ao nascer (BPN), provenientes de mães que sofreram desnutrição intrauterina, devido restrição alimentar materna de 50% durante o período gestacional. Seis horas após instilação de LPS (100μl/750 μg/animal) nos animais experimentais e salina nos controles, foi realizado o lavado broncoalveolar (LBA) para verificar o infiltrado celular e posteriormente retirado o pulmão para analise histológica da região peribronquial onde observados menor infiltrado celular no pulmão dos animais BPN inflamados. A análise proteica do tecido pulmonar das enzimas COX-1, COX2, 5-LO, TLR-4 e GR foram realizadas pela técnica de Western blotting, enquanto que a quantificação das citocinas no tecido pulmonar e no soro, da corticosterona, ACTH e melatonina no soro por kit Multiplex, a concentração de LTB4 e PGE2, enzimas HDAC e HDAC-1 no tecido pulmonar foram realizados por kit EIA, e a metilação global do DNA por kit DNA methylation no tecido pulmonar. Verificamos que o grupo BPN-LPS apresentou baixos níveis de COX-2, já a COX-1 apresentou maior expressão em níveis basais (BPN controle) e diminuição da expressão após estímulo no grupo BPN-LPS. O estímulo com LPS não apresentou diferença entre os níveis de PGE2. De outro lado, a enzima 5-LO e a produção de LTB4 apresentaram perfil semelhante quanto ao grupo nutrido (PNN) com aumento apenas no grupo estimulado PNN-LPS. Ratos estimulados com LPS apresentaram diminuição da expressão de TLR-4 apenas no grupo BPNLPS. Foi observado que o GR apresentou diminuição da sua expressão nos animais PNN-LPS e aumento da sua expressão nos ratos BPN-LPS quando comparado com os ratos PNN também estimulados; este mesmo perfil pode ser observado no ACTH. Diferentemente da corticosterona onde ratos PNN apresentaram aumento desse hormônio após estímulo com LPS (PNN-LPS) e níveis basais aumentados no grupo BPN em relação ao PNN. Já a melatonina apresentou perfil semelhante em ambos os grupos, sendo que após estímulo inflamatório houve aumento da concentração desse hormônio em relação ao seu controle. Foi observado desregulação na produção de citocinas inflamatórias tanto no tecido pulmonar quanto no soro. No tecido pulmonar todas as citocinas IL-1β, IL-6, TNFα, IL-10, IFNγ e leptina não apresentaram aumento após estímulo inflamatório no grupo BPN-LPS. Quando essas mesmas citocinas foram avaliadas no soro, apenas a IL-6 apresentou aumento após estímulo com LPS no grupo BPN-LPS. No soro, o IFNγ não apresentou diferença entre os grupos e o TNFα falhou em aumentar em ambos os grupos (PNN-LPS e BPN-LPS) após estímulo inflamatório. De acordo com os dados obtidos, podemos observar que a redução da resposta inflamatória permanece na geração F2. Realizamos ainda a avaliação da metilação global do DNA e as enzimas HDAC e HDAC-1 no tecido pulmonar para verificar possíveis alterações epigenéticas envolvidas e observamos que ratos do grupo BPNcontrole já apresentam níveis de metilação elevados mesmo antes do estímulo inflamatório. Na atividade da HDAC, observamos aumento dessa enzima após estímulo inflamatório no grupo BPN-LPS. Além disso aumento do inibidor da HDAC-1 no grupo estimulado PNN-LPS. Esses dados sugerem que, a redução da resposta inflamatória observada na geração F2 pode estar relacionada às alterações epigenéticas observadas através desses mecanismos.