Navegando por Palavras-chave "Condroitim sulfato"
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- ItemAcesso aberto (Open Access)Avaliação do uso de células de neuroblastoma Neuro2a como modelo para estudo da inibição de crescimento axonal em 2D e 3D(Universidade Federal de São Paulo, 2022) Monti, Marina Kuntz [UNIFESP]; Porcionatto, Marimelia Aparecida [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6155537170968904; http://lattes.cnpq.br/2509211579358762Após uma lesão encefálica, o sistema nervoso central (SNC) apresenta potencial de regeneração limitado devido à formação da cicatriz glial que atua como uma barreira a qual impossibilita a restauração das sinapses neuronais da região lesionada. Essa cicatriz glial é produzida principalmente por astrócitos e oligodendrócitos reativos que produzem moléculas inibidoras do crescimento axonal, sendo uma delas o proteoglicano de condroitim sulfato (PGCS). Suas cadeias laterais de condroitim sulfato (CS) são responsáveis pelas propriedades inibitórias de crescimento axonal. A bioimpressão tridimensional (3D) surgiu na última década como um novo modelo in vitro que possibilita criar estruturas complexas que mimetizam o microambiente tecidual, e que pode vir a ser usado para explorar a influência da matriz extracelular em diversos processos biológicos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a linhagem Neuro2a como modelo adequado para estudos da participação de CS na inibição de crescimento axonal em um sistema 2D e comparar com um tecido biomimético produzido por bioimpressão 3D. Nossos resultados demonstraram as células Neuro2a bioimpressas 3D apresentam comportamento distinto do observado no cultivo celular 2D. Enquanto as células Neuro2a in vitro 2D apresentaram morfologia plana e extensões de neuritos, o cultivo celular em material 3D mostrou que as células se rearranjaram em esferóides sem nenhum prolongamento. Em conclusão, este trabalho sugere que a linhagem Neuro2a pode servir como modelo para estudar crescimento axonal quando cultivado em 2D e poderá ser utilizado como modelo para estudos da formação de esferóides neuronais bioimpressos em 3D.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Avaliação dos efeitos das ondas de choque nos glicosaminoglicanos sulfatados e ácido hialurônico na regeneração óssea em fêmures de ratos submetidos à perfuração cirúrgica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011-12-09) Santos, Paulo Roberto Dias dos [UNIFESP]; Faloppa, Flávio [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Introdução: As ondas de choque têm sido utilizadas para estimular a regeneração óssea em pacientes com retardo de consolidação nas fraturas. Dentre as estruturas envolvidas na osteogênese, a matriz extracelular, composta de glicosaminoglicanos (GAGs), tem um papel fundamental. Objetivo: Distinguir e quantificar os glicosaminoglicanos sulfatados e ácido hialurônico (AH) de fêmures de ratos, após perfuração óssea e aplicação de ondas de choque. Métodos: A amostra foi constituída de 50 ratos machos da linhagem Wistar, com três meses de idade e cerca de 300 gramas de peso. Os animais foram divididos em dois grupos e submetidos à cirurgia com perfuração óssea de dois milímetros, associado ou não a aplicação de ondas de choque, sendo feito eutanásia no terceiro, sétimo, 14o, 21o e 28o dias. A análise dos glicosaminoglicanos foi realizada pela eletroforese em gel de agarose, densitometria das bandas de migração e pelo teste ELISA-like. Resultados: Houve aumento significativo dos valores dos glicosaminoglicanos sulfatados no período de três a 28 dias com predominância do condroitim sulfato. O ácido hialurônico, no terceiro dia de sacrifício, mostrou aumento significativo no grupo submetido às ondas de choque em relação ao grupo controle. Conclusão: A aplicação de ondas de choque em fêmures perfurados de ratos estimularam a expressão de glicosaminoglicanos sulfatados durante a reparação óssea e a expressão do ácido hialurônico, no grupo três dias, em relação ao grupo controle.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Bloqueio da migração de células-tronco neurais por condroitim sulfato via ativação de ROCK(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-04-29) Galindo, Layla Testa [UNIFESP]; Porcionatto, Marimelia Aparecida [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6155537170968904; http://lattes.cnpq.br/5977155628700783; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)A neurogênese é um evento importante no sistema nervoso central em desenvolvimento e no adulto, e é caracterizada pela geração de novos neurônios a partir de células-tronco neurais (CTN) localizadas pricipalmente na zona subventricular e no hipocampo. Uma lesão altera o padrão normal da neurogênese e sinais quimioatrativos estimulam a migração de neuroblastos dos nichos neurogênicos para o local lesado, onde há a formação da cicatriz glial e produção de moléculas inibitórias do crescimento axonal, entre elas, proteoglicanos de condroitim sulfato. A sinalização desencadeada por fatores solúveis e por componentes da matriz ativa membros da família das RhoGTPases, que desempenham funções essenciais no processo de migração celular. Nossa hipótese é que componentes da matriz regulam diferentemente a migração de neuroblastos por alterações na dinâmica de adesão celular e na atividade de RhoGTPases. Utilizando modelo de lesão traumática no córtex motor do camundongo adulto observamos que os neuroblastos que migraram para o local lesado não foram capazes de penetrar na região, rica em proteoglicanos de condroitim sulfato. Em seguida, avaliamos a migração in vitro utilizando CTN cultivadas como neuroesferas. Observamos que o condroitim sulfato (CS) exerceu uma ação inibitória sobre a migração das CTN, diminuindo a velocidade inicial de migração e alterando a dinâmica de protrusão. Além disso, CS promoveu aumento no tamanho das adesões formadas durante a protrusão e dificultando o espraiamento das CTN. Porém, a inibição de ROCK estimulou a migração das CTN tanto em superfícies recobertas por laminina quanto por CS e reverteu alguns de seus efeitos inibitórios, como a retomada da capacidade de espraiamento celular, e a diminuição do tamanho das adesões. Finalmente, a inibição do receptor de Nogo (NgR1), reverteu o efeito inibitório de CS sobre a migração das CTN in vitro. Concluímos, assim, que a inibição da migração de CTN provocada por CS se dá pela ativação de ROCK via ativação de NgR1.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Desvendando a relação estrutura-função de condroitim sulfatos : estudo de efeitos anti-inflamatórios sobre condrócitos e macrófagos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-08-31) Cunha, Andre Luiz da [UNIFESP]; Michelacci, Yara Maria Correa da Silva [UNIFESP]; Aguiar, Jair Adriano Kopke de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5023687526571878; http://lattes.cnpq.br/3137165519167799; http://lattes.cnpq.br/5971806359279104; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)The aim of the present study was to investigate the activities of chondroitin sulfates (CS) with different structures on cultured chondrocytes and macrophages. CS were extracted and purified from bovine trachea (CSTB), porcine trachea (CSTS), chicken sternum (CSFr) and skate (CSRj) cartilage. The preparations were 90-98% pure, with ~1% proteins, nucleic acids and keratan sulfate contaminants. Structural analysis of these CS and of commercial C4S and C6S has shown that most of their disaccharides are monosulfated: C4S, CSTB, CSTS and CSFr are predominantly 4-sulfated (64-78%), while C6S is more 6-sulfated (71%) and CSRj is more heterogenous. All the CS showed minor ammounts of non-sulfated disaccharides (2-7%), and 2,6-disulfated disaccharides were detected in C6S (7%) and CSRj (14%). All CS were polydisperse, with modal molecular weights of 26-135 kDa. The different CS reduced the IL-1β-induced liberation of NO and PGE2 on both human and horse chondrocytes, and CSTB was the most effective. C4S, C6S, CSFr and CSRj reduced the LPS-induced TNF-α liberation, but not IL-6, on RAW 264.7 immortalized macrophage-like cell line. In contrast, on bone marrow derived macrophages (primary culture), C4S, C6S, CSTB and CSTS reduced the LPS-induced liberation of TNF-α, IL-6, IL-1β, and NO, indicating that the RAW response to CS was different from that of primary macrophages. All CS, except for commercial C4S, inhibited the translocation of NF-κB transcription factor to the nucleus of LPS-challenged bone marrow derived macrophages. In conclusion, our results have shown that CS with different structures had anti-inflammatory effects on macrophages, besides the already known effects on chondrocytes, suggesting that, in vivo, a synergic action of these molecules on different cell types help to achieve its desired therapeutic effects.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Efeito do condroitim sulfato na lesão por isquemia e reperfusão de fígado de ratos(Universidade Federal de São Paulo, 2021-12-15) Pierre, Maria Luisa Marques [UNIFESP]; Nagaoka, Márcia Regina [UNIFESP]; Kouyoumdjian, Maria [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1459155835598747; http://lattes.cnpq.br/3554142919645884; http://lattes.cnpq.br/0117572567670846; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Introdução: O transplante de fígado é a principal terapia para doenças hepáticas irreversíveis. No entanto, durante o processo do transplante, podem ocorrer lesões no tecido, devido à isquemia e reperfusão, levando a disfunção do órgão. Portanto, o melhor entendimento do processo de isquemia e reperfusão é imprescindível para prevenir ou minimizar os danos ao tecido. O condroitim sulfato (CS) é um glicosaminoglicano abundante na matriz extracelular, e sua ação benéfica já foi estudada em diferentes tecidos e modelos experimentais, sendo capaz de melhorar processos inflamatórios, estresse oxidativo e morte celular. Objetivo: avaliar o efeito do CS na lesão por isquemia fria e reperfusão morna ex vivo de fígados de ratos. Métodos: Fígados de Ratos Wistar (6-8 semanas) foram submetidos a isquemia por 24h em Solução de Wisconsin a 4oC, e reperfusão por 20 ou 40 min, a 37oC, com solução de Krebs-Henseleit. O CS (120 mg/kg peso fígado) foi adicionado à solução de preservação (isquemia), no líquido de reperfusão ou em ambos. Fígados não isquêmicos, mas submetidos ao mesmo processo de reperfusão, foram utilizados como controle. Viabilidade hepática foi analisada pela liberação de glicose, depuração de bromossulfaleína e secreção de bile. Morte celular geral foi avaliada por ELISA, necrose por ensaio de exclusão de azul de Tripan e apoptose por atividade das enzimas caspase-3 e catepsina, imunoistoquímica de caspase-3 e análise histológica de corpos apoptóticos. Estresse oxidativo foi avaliado pela atividade de catalase e superóxido dismutase total e mitocondrial. Modulação hepática do óxido nítrico (NO) foi avaliada pela concentração de NO e por imunoistoquímica da enzima NO sintase endotelial (eNOS) e induzida (iNOS). Os resultados foram expressos pela média ± EPM. A análise estatística foi realizada por ANOVA e teste post-hoc de Tukey. Resultados: A adição do CS não alterou a viabilidade hepática dos fígados reperfundidos. Entretanto, CS piorou morte celular geral e necrose após 40 e 20 min, respectivamente, quando adicionado na isquemia ou reperfusão, porém quando adicionado aos dois períodos os níveis decaem. Foi observada maior atividade de catepsina e caspase-3 (atividade enzimática e imunoistoquímica) após 20 min e diminuição aos 40 min, com ou sem CS. Corpos apoptóticos foram identificados em menos de 5% da área de tecido analisada, mesmo após 40 min de reperfusão. O CS não afetou a atividade das enzimas antioxidantes analisadas. A concentração de NO diminui após 20 min de reperfusão, principalmente quando o CS foi adicionado aos dois períodos, mas aumenta após 40 min. Não foi observada alteração na expressão de eNOS, por outro lado, houve aumento na expressão de iNOS após 20 min de reperfusão, e diminuição após 40 min, com ou sem CS. Conclusão: O CS não afetou a viabilidade hepática. Na morte celular geral e necrose parece ter melhor ação quando adicionado aos dois períodos estudados. Mais estudos com diferentes doses e períodos de tratamento são necessários para melhor entender seu efeito na apoptose, estresse oxidativo e alterações na microcirculação.