Navegando por Palavras-chave "Blastocisto"

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    Efeito da fragmentação de dna espermático no desenvolvimento e no perfil lipídico de blastocistos de camundongos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-12-17) Melo, Augusto Azzolini De [UNIFESP]; Lopes, Paula Intasqui [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objectives: To evaluate the effect of sperm DNA fragmentation on the development and metabolism of mice blastocysts. Method: Male FVB/NJ and female C57BL/6J mice were used. Initially, a study to validate an experimental model of sperm DNA fragmentation induction was performed. For this, thirteen males were submitted to testicular heat stress (Heat stress group, n=13), and fourteen males, not submitted to heat stress, formed the control group (n=14). In these groups, sperm concentration, motility and DNA fragmentation by an alkaline comet assay were analyzed. With the validation of this model, two substudies were performed, to evaluate the effect of sperm DNA fragmentation on: (1) embryos produced by in vitro fertilization and cultivated until the blastocyst stage, and (2) embryos fertilized in vivo and collected on blastocyst stage. Embryos from the Control and Heat stress groups were evaluated regarding their development, using cleavage rate, blastocyst rate, and viability rate, and lipid profile, by mass spectrometry (microQTOF-QII). Groups were compared using an unpaired Student’s t test or the Mann-Whitney test (p<0.05). Results: In the validation of the experimental model, groups did not differ regarding sperm concentration and motility. However, the Heat stress group presented an increase in sperm DNA fragmentation. In both substudies, groups did not differ regarding cleavage rate (only for substudy 1), blastocyst rate and percentage of viable cells. On the other hand, blastocysts from the Heat stress group presented a decrease in total cell count when compared to those of the Control group. In substudy 1, the Heat stress group presented an increase in the flavonoids class of lipids. In substudy 2, this group presented a decrease in the glycerolipids, fatty acids, sphingolipids, and glycerophospholipids categories. Conclusion: The proposed experimental model of sperm DNA fragmentation induction through heat stress allowed the study of the effects of sperm DNA fragmentation on embryo development. Embryos generated with sperm from mice induced to high sperm DNA fragmentation do no present alterations on their development, but present a decreased total number of cells. On the other hand, embryo lipid profile is altered due to sperm DNA fragmentation.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Efeito da variação da temperatura no desenvolvimento embrionário murino
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-12-17) Moriyama, Dóris; Lo Turco, Edson [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0251394799200508; http://lattes.cnpq.br/2796906075500374; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivo: Estudar o efeito da variação da temperatura no desenvolvimento embrionário murino pré-implantação e no metabolismo dos embriões produzidos in vitro. Métodos: Este estudo foi dividido em 2 experimentos. Em ambos, os embriões murinos foram cultivados in vitro desde o estágio de zigoto até o estágio de blastocisto sob 3 variações de temperatura: Tratamento 1 (T1) a 37ºC durante o dia e 35,5ºC durante a noite, Tratamento 2 (T2) a 38,5ºC durante o dia e 37ºC a noite e Controle (C) a 37ºC constante. O Experimento I visava avaliar o efeito da variação da temperatura: (i) nas taxas de clivagem, mórula e blastocisto; (ii) na classificação morfológica dos blastocistos de acordo com Gardner et al., 2000 e SART, (iii) na fragmentação de DNA em blastocistos por meio do teste TUNEL e (iv) na secretômica embrionária do meio de cultura por espectrometria de massas. No Experimento I foram utilizados embriões C57BL/6J coletados a fresco e cultivados in vitro sob as 3 variações de temperatura em incubadoras tradicionais. O Experimento II visava avaliar o efeito da variação da temperatura: (i) na morfocinética embrionária por meio da tecnologia de time-lapse, (ii) na classificação morfológica dos blastocistos de acordo com Gardner et al., 2000 e SART, (iii) na expressão relativa dos genes Bax, Bcl2, Apaf-1 e Igf2 em blastocistos por qRT-PCR e (iv) na secretômica do meio de cultura de cada blastocisto cultivado individualmente, por meio de espectrofotometria. No experimento II foram utilizados embriões híbridos B6C3F1 x B6D2F1 congelados e incubadoras do tipo time-lapse. O Experimento I utilizou na análise estatística as unidades amostrais embrião individual e gota de meio de cultura. Já o Experimento II, utilizou como unidade amostral apenas o embrião individual. Resultados: No Experimento I, foi observada uma taxa de mórula significativamente superior no grupo T1, quando comparado ao grupo T2 e C, na análise por blastocisto (N=453) e por gota (N=78). Já grupo T2, destacou-se por uma taxa de blastocisto significativamente superior aos outros 2 grupos na análise por blastocisto (N=453). Com relação a classificação morfológica nos blastocistos, o grupo T1 mostrou notas significativamente inferiores e, portanto, blastocistos de menor qualidade, quando comparado aos 2 outros grupos de estudo. O grupo T1 também apresentou uma porcentagem de fragmentação de DNA 2 vezes maior quando comparado aos 2 outros grupos de estudo. A secretômica embrionária do meio de cultura demonstrou que os aminoácidos prolina e leucina eram os principais preditores da formação de blastocistos. Além disso, uma separação significativa do conjunto de metabólitos representativos do grupo T1 foi observada, enquanto T2 e C eram caraterizados por um conjunto metabólitos mais semelhantes. Os metabólitos característicos do grupo T1 apontavam um metabolismo estressado. No Experimento II (N= 161 blastocistos), com relação a morfocinética embrionária foram encontradas diferenças para as variáveis t2, t3, t4, ECC2, t5, t8, tSB, tB, tHB entre os grupos T1 e T2/C, sendo que os embriões pertencentes ao grupo T1 apresentaram um desenvolvimento mais lento quando comparados aos 2 outros grupos de estudo. Com relação a classificação morfológica dos blastocistos, o Experimento II apresentou resultados muito semelhantes aos do Experimento I. A análise da expressão diferencial do gene Apaf1 mostrou que o mesmo é significativamente mais abundante nos blastocistos do grupo T1 quando comparado ao grupo T2. A secretômica embrionária individual dos blastocistos mostrou novamente que o grupo T1 era caracterizado por um conjunto de metabólitos significativamente diferentes dos 2 outros grupos de estudo. O grupo T2, por sua vez, não demonstrou efeitos negativos em todo o estudo. Conclusão: A variação da temperatura altera o desenvolvimento embrionário e o metabolismo murino pré-implantação.
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    Estudo prospectivo randomizado comparando as taxas de gravidez após a transferência de embriões humanos no terceiro e quinto dia de cultivo in vitro
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Motta, Eduardo Leme Alves da [UNIFESP]; Baracat, Edmund Chada [UNIFESP]
    Realizou-se estudo prospectivo e aleatorizado para avaliar a eficacia do crescimento de embrioes humanos, fertilizados in vitro e cultivados em meios sequenciais ate o dia 5 pos-fertilizacao. Comparou-se tambem as taxas de gravidez, implantacao e a incidencia de gestacao multipla apos a transferencia uterina de embrioes nos dias 3 e 5 pos-fertilizacao. Estudaram-se 147 ciclos de Fertilizacao in vitro divididas em dois grupos: Grupo I (N=73) onde os embrioes foram cultivados em meio rico em aminoacidos e pobre em piruvato e glicose, sendo transferidos ao utero no dia 3 pos-fertilizacao e Grupo II (N=74) onde prolongou-se o periodo de cultivo ate o dia 5 pos-fertilizacao, em meio sequencial, suplementado com glicose, aminoacidos e vitaminas, e procedendo a transferencia de embrioes em estagio de blastocisto. Os grupos I e II nao apresentaram diferencas estatisticamente significantes quanto a idade. oocitos recuperados, oocitos em metafase II, fertilizacao e taxas de clivagem ate o dia 3 pos-fertilizacao, bem como nas taxas de gravidez, pois obteve-se 22 gestacoes no grupo I (30,1 por cento ) e 25 no II (33,8 por cento ). O numero de embrioes transferidos no dia 3 pos-fertilizacao (3,8n0,7) foi significativamente maior que no de blastocisto (1,9nO,8), ocasionando maior ocorrencia de gestacao multipla, porem a taxa de implantacao do grupo II (48, 1 por cento ) foi estatisticamente superior ao I (40,2 por cento ). Concluiu-se que fertilizacao in vitro por prolongado periodo de tempo, com meio sequencial, propiciou a obtencao de blastocistos viaveis no dia 5 pos-fertilizacao. As taxas de gravidez foram comparaveis quando se procedeu a transferencia de embrioes nos dias 3 e 5, porem em razao da maior taxa de implantacao dos blastocistos, pode-se minimizar a ocorrencia da gestacao multipla transferindo-se menor numero de embrioes
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    Acesso aberto (Open Access)
    Relação entre o perfil metabolômico do secretoma embrionário e seu desenvolvimento in vitro
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-11-13) Camillo, Jacqueline [UNIFESP]; Cedenho, Agnaldo Pereira [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1386922092780490; http://lattes.cnpq.br/3650266524153329; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The need for a noninvasive, reliable and rapid strategy for embryo evaluation has promoted metabolomic studies in the area of assisted human reproduction. The embryo physiology reveals more about the embryo than can be determined by morphology alone, therefore, we believe that the preimplantation embryo metabolism shows characteristics that may be associated with embryonic development potential. In this context, we hypothesized that levels of culture medium metabolites reflect the embryonic development potential. Objectives: Evaluating the embryonic secretome metabolomic profile and examine its relation with (i) morphological quality in vitro culture D3 and (ii) its ability to reach the blastocyst stage. Method: The metabolomic analysis of the embryonic secretoma in the D3 culture medium of human embryos cultured in vitro was performed. For (i) evaluation of the morphological quality to the D3, the samples were grouped according to the embryo development, in High Quality or Low Quality. For (ii) assessment of the competence to reach the blastocyst stage, the samples were grouped according to the evolution to D5 \ D6 in Blastocyst or not Blastocyst. The samples were analyzed using a quantitative and qualitative approach using the AbsoluteIDQ® p180 Kit (Biocrates Life Science, AG, Austria). Metabolites were compared using the MannWhitney U test. Results: The analysis of the profile of the embryonic secretome in the culture medium showed differences between the evaluated groups. Statistical analysis revealed 25 metabolites with statistically different concentrations between embryos that showed high or low quality in D3 and 29 metabolites with different concentrations when evaluated the embryonic competence to reach the stage of blastocyst. Conclusion: the metabolites, products of the embryonic secretome in the culture medium of the third day of in vitro development, reflect embryonic morphological quality in D3 and the competence to reach or not to blastocyst stage.