Navegando por Palavras-chave "β1-integrinas"

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    Análise da N-glicosilação aberrante de TIMP-1 e seu papel na progressão do melanoma
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-01-17) Justo, Beatriz Laís [UNIFESP]; Jasiulionis, Miriam Galvonas [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3057188718614807; https://lattes.cnpq.br/9283411974338596
    Diversos estudos mostram que o Inibidor Tecidual de Metaloprotease 1, TIMP-1, tem sua expressão aumentada em diferentes tipos de tumores e que este aumento está correlacionado com um pior prognóstico. Hoje, sabe-se que TIMP-1 apresenta funções pleiotrópicas que vão desde a inibição de Metaloproteases de Matriz (MMPs) até a ativação de diferentes vias de transdução de sinais através de sua ligação com seus receptores de membrana, CD63 e β1- integrina. Trabalhos anteriores do nosso grupo também demonstraram haver aumento da expressão de TIMP-1, formação do complexo supramolecular TIMP1 / CD63 / β1-Integrina e ativação de vias de sinalização intracelular ao longo da progressão do melanoma. Recentemente, um estudo utilizando células de câncer de cólon demonstrou que TIMP-1 apresenta ramificações do tipo β1,6-N-acetilglucosamina, uma N-glicosilação do tipo aberrante catalisada pela enzima MGAT5, e ainda, a presença desta N-glicosilação aberrante em TIMP 1 foi diretamente correlacionada com sua função de induzir vias de sinalização intracelulares que modulam o comportamento celular. Entretanto, ainda pouco se sabe sobre o estado de glicosilação de TIMP-1, inclusive em melanomas. Por esse motivo, este trabalho teve como objetivo analisar a presença de N-glicosilação aberrante em TIMP-1 e entender como essa N glicosilação aberrante interfere nos papéis que TIMP-1 exerce, tanto na inibição de MMPs quanto na sua capacidade de se ligar aos seus receptores CD63 e β1-Integrina para ativar vias de sinalização envolvidas em sobrevivência e resistência à morte celular, em linhagens celulares de modelo de progressão do melanoma. Através de ensaios de pooldown com L-PHA, lectina que reconhece tal padrão aberrante de N-glicosilação, demonstramos que TIMP-1, CD63 e β1-Integrinas são alvos da enzima MGAT5 em células de melanoma, principalmente metastáticas. Além disso, um plasmídeo contendo a sequência gênica de TIMP-1 com mutações pontuais em seus dois sítios de N-glicosilação foi desenvolvido para induzir a expressão de TIMP-1 aglicosilado. Este plasmídeo será utilizado em ensaios que visam entender como esse padrão aberrante de N-glicosilação interfere nos papéis que TIMP-1 exerce na progressão do melanoma.