Teses e Dissertações
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Navegando Teses e Dissertações por Orientador(es) "Azevedo, Carla Cristina Lopes de [UNIFESP]"
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- ItemSomente MetadadadosEfeito da resistência à morte celular por perda de adesão (anoikis) na expressão do sindecam-4 e no ciclo celular de células endoteliais em cultura(Universidade Federal de São Paulo, 2013-04-25) Carneiro, Bruna Ribeiro [UNIFESP]; Azevedo, Carla Cristina Lopes de [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Tumors produce several molecules that facilitate their proliferation, invasion and maintenance, especially proteoglycans. The syndecan-4, a heparan sulfate proteoglycan, can act as a co-receptor of growth factors and proteins of the extracellular matrix (ECM) by increasing the affinity of adhesion molecules to their specific receptors. It participates together with integrins and FAK (focal adhesion kinase) in cell adhesion at focal contacts connecting the ECM to the cytoskeleton. Changes in the expression of syndecan-4 have been found in tumor cells, indicating its involvement in cancer. The acquisition of resistance to cell death induced by blockade of adhesion to the substrate (anoikis resistance) is a feature of neoplastic transformation and a critical step during the metastatic process. Aiming to clarify the role of sindecan-4 in the process of anoikis and in the processes of cell transformation, wild endothelial cells (EC) were subjected to transformation induced by blockade of adhesion to the substrate (Adh-EC) and studied in comparison with endothelial cells transfected with the EJ-ras oncogene (EJ-ras EC) in relation to: tumorigenic capacity, adhesive ability, cell cycle, cell proliferation, synthesis and degradation of sulfated glicosaminoglycans (SGAG), expression and localization of syndecam-4 and heparanase expression. After cycles of blocking adhesion, phenotypic changes were observed in the surviving cells. The clones obtained exhibited characteristics similar to tumorigenic cells: multilayer growth, loss of contact inhibition, tumorigenic capacity, uncontrolled cell cycle, differences at the dependence of growth factors present in fetal bovine serum (FBS), decreased adhesive capacity and a major anti-proliferative effect after treatment with specific inhibitors of PI3K/Akt e Ras/Raf/MAPK/ERK pathways. Further, an increase in the synthesis of heparan sulfate (HS) was detected in the clones resistant to anoikis. This increase is observed for both HS chains present in cells and secreted to culture medium. Structural changes in HS chains were also observed. We have seen that there is an increase in the syndecan-4 and heparanase expression in EJ-ras EC and Adh-EC cells. The data suggests that the syndecan-4 is involved in the acquisition of resistance to cell death induced by blockade of adhesion to the substrate (resistance to anoikis), contributing to neoplastic transformation.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Expressão de moléculas da matriz extracelular em células endoteliais resistentes ao anoikis(Universidade Federal de São Paulo, 2016-04-19) Lopes, Silvana de Araujo [UNIFESP]; Azevedo, Carla Cristina Lopes de [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)The extracellular matrix (ECM) is a structure composed of several macromolecules that are differently distributed among tissues of organisms. The interaction between ECM molecules and receptors present on the cell membrane affect several cell properties, including migration, proliferation, differentiation and apoptosis.The process of apoptosis by loss of cell adhesion is named anoikis. This process is considered an important mechanism in preventing independent growth of cell adhesion, because it difficult the binding of cells to inappropriate matrix, thus preventing the colonization of other tissues. However, resistance to anoikis is a critical step in tumor progression and metastasis.Because of the importance and complexity of cell-cell and cell-ECM interactions, studies on the ECM components have important relevance because it represents progress in the development of new drugs for the treatment of cancer.Thus, we studied the expression and localization of various ECM molecules in endothelial cells derived from rabbit aorta (EC), EC transfected with EJ-ras oncogene (EJ-ras EC) and EC resistant to anoikis (Adh1-EC e Adh2-EC).The results show that there was a decrease in the expression of fibronectin, collagen IV and hyaluronic acid as well as an increase in the expression of perlecam, laminin, integrinsαvβ3 and α5β1, MMPs-2 and -9 and hyaluronidases 1, 2 and 3 in anoikis resistant and transfected endothelial cells in relation to parental cells. These results suggest that changes in ECM molecules expression can be directly related to the acquisition of resistance to anoikis in endothelial cells.
- ItemEmbargoSilenciamento gênico do sindecam-4 em células endoteliais resistentes ao anoikis(Universidade Federal de São Paulo, 2019-06-14) Pernambuco Filho, Paulo Castanho de Almeida [UNIFESP]; Azevedo, Carla Cristina Lopes de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6280504619546509; http://lattes.cnpq.br/0733903078600862A resistência de células tumorais à morte celular por perda de adesão (anoikis) é uma das principais características celulares que contribuem para a progressão e metástase tumoral. Como um fenômeno funcional, a resistência ao anoikis é um importante evento dentro da cascata metastática, sendo um prérequisito para disseminação e colonização em sítios distantes. Entretanto, os mecanismos envolvidos na regulação da resistência ao anoikis ainda não estão completamente elucidados. Várias moléculas estão envolvidas nos processos de sobrevivência, adesão e proliferação celular, entre elas o sindecam-4, um proteoglicano de heparam sulfato (PGHS). Mudanças na expressão do sindecam-4 tem sido comumente encontradas em células tumorais, indicando o seu envolvimento no câncer. Assim, para analisar o papel deste proteoglicano em diferentes eventos como, proliferação, crescimento, controle do ciclo celular, adesão, apoptose, invasão celular e expressão de proteínas da via PI3K/AKT/mTOR realizamos o silenciamento gênico do sindecam-4 em células endoteliais resistentes ao anoikis utilizando a técnica de RNA de interferência (miRNA). Após o silenciamento gênico, observamos uma diminuição da expressão proteica e gênica do sindecam-4, acompanhada por uma redução do número de cadeias de heparam e condroitim sulfato no extrato celular e no meio de cultura. Os clones silenciados (miR-Syn-4-1-Adh1-EC e miR-Syn-4-2-Adh1-EC) apresentaram maior incorporação de BrdU após estímulo com soro, indicando que estas células se tornaram dependentes dos fatores de crescimento para proliferar, e menor taxa de crescimento. Em relação ao controle do ciclo celular, observamos uma diminuição no número de células na fase S. A capacidade adesiva ao colágeno foi significativamente maior nos clones silenciados, bem como apresentaram maior taxa de apoptose e menor taxa invasiva quando comparadas à célula endotelial parental (Adh1-EC). Os dados obtidos são similares aos encontrados para as células endoteliais selvagens (EC). A expressão de AKT, mTOR e PTEN, também foi investigada. Após silenciamento gênico do sindecam-4, observamos diminuição na expressão dos genes que codificam essas proteínas. Essa diminuição gênica não foi acompanhada pela diminuição da expressão proteica, exceto mTOR que apresentou uma redução, porém não significativa. Esses resultados nos levam a acreditar que o silenciamento gênico do sindecam-4 reverteu o comportamento tumorigênico das células resistentes ao anoikis. Essas e outras descobertas sugerem que o sindecam-4 é adequado para a intervenção farmacológica, fazendo deste um alvo atraente para a terapia do câncer.