Caracterizacao de anticorpos monoclonais dirigidos a lipofosfoglicano de formas promastigotas de Leishmania(Leishmania) amazonensis: papel protetor na infeccao
Data
2002
Autores
Valero Lapchik, Valderez Bastos 
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Este estudo analisou o papel do lipofosfoglicano (LPG) de formas promastigotas de L. (L.) amazonensis, na infectividade do parasita, utilizando anticorpos monoclonais (MoAbs) VST-1 (IgG3) e VST-2 (IgM) dirigidos contra LPG. Neste trabalho foi tambem utilizado o MoAb ST-3 (IgG3), produzido contra glicoesfingolipideos de formas amastigotas, que reconhece em promastigotas de L. (L.) amazonensis a fracao de LPG. Por imunofluorescencia o MoAb VST-1 apresentou marcacao de superficie com formas promastigotas de L. (L.) amazonenses; o MoAb VST-2 reconheceu promastigotas de L. (L.) amazonenses e L. (L.) major, enquanto que o MoAb ST-3 reconheceu formas promastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis. Estes resultados foram confirmados por radioimunoensaio (RIA) celular. Por PAGE-SDS, foi demonstrado que LPGs de L (L.) amazonensis e de L. (L.) major apresentam-se polidispersos com pesos moleculares aparentes entre 35 e 80 kDa e entre 8 e 45 kDa, respectivamente. Por Westem 81ot, a reatividade dos MoAbs VST-1 e ST-3 com LPG purificado de L. (L.) amazonenses foi intensa, por outro lado, o MoAb VST-2 reagiu preferencialmente com LPG de L. (L.) major. Os MoAbs VST-1, VST-2 mostraram-se especificos para LPG, nao reconhecendo outras fracoes de glicolipideos quando analisados por RIA. f A reatividade para os MoAbs VST-1, VST-2 e ST-3 por RIA foi favorecida quando o LPG purificado foi adsorvido em superficie positiva apos tratamento da placa de poliestireno com poli-L-lisina, ou em superficie contendo componentes lipidicos de membrana, como fosfatidil colina e colesterol. Foi constatado um aumento da sensibilidade do metodo em cerca de uma ordem de grandeza em relacao ao ensaio tradicional, na placa de poliestireno sem tratamento previo. Nestas condicoes se verificou que os MoAbs VST-1 e ST-3 detectam baixas concentracoes de LPG como 100 ng/poco, e o MoAb VST-2, cerca de 1 ng do antigeno/poco. Estudos de caracterizacao...(au)
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Citação
São Paulo: [s.n.], 2002. 130 p. ilustab.