Análise do efeito do extrato padronizado de Ginkgo biloba na expressão dos receptores colinérgicos e de BDNF no córtex pré-frontal de camundongos com redução no transportador vesicular de acetilcolina (VAChT)
Data
2022-12-21
Autores
Gomes, Renan Sousa 
Orientadores
Cerutti, Suzete Maria
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
O eficiente funcionamento do sistema colinérgico é de crucial importância para a
realização de tarefas diárias, uma vez que tal sistema modula várias vertentes da cognição.
Alteração no sistema colinérgico no prosencéfalo basal tem sido relatada em pacientes com a
doença de Alzheimer do tipo esporádica (DAE), uma das doenças neurodegenerativa mais
prevalente, associada ao envelhecimento, caracterizada pela perda progressiva de funções
cognitivas, sendo a memória episódica a mais afetada. Alterações da função do sistema colinérgico
através da modulação da síntese, degradação ou de receptores para acetilcolina (ACh) tem sido
associada à DAE são descritas no córtex pré-frontal e na formação hipocampal. Em função da
importância do fator neurotrófico derivado do encéfalo (BDNF) para as mudanças
morfofuncionais e plasticidade neural necessárias para funções como formação de memória de
longo prazo e neurogênese, sua redução também tem sido relacionada à DA. Sabe-se que o extrato
padronizado de Ginko biloba (EGb) possui efeito neuroprotetor em animais e humano. Também
tem sido utilizado terapeuticamente na tentativa de reverter as alterações neurológicas, como nas
descritas na SAD. Dados de nosso grupo mostraram que o extrato de Ginkgo biloba melhorou a
retenção da memória de longo prazo em ratos jovens saudáveis. Ainda, evidenciamos o efeito
neuroprotetor deste extrato em ratos de meia idade (12 meses) no córtex pré-frontal (CPF) e
hipocampo. Buscando compreender o efeito do tratamento com EGb na SDA, este estudo avaliou
o efeito do tratamento crônico com EGb na expressão de receptores colinérgicos nicotínico do tipo
α7, muscarínico do tipo M1 e de BDNF no CPF, nas regiões pré-límbica (PrL) e infra límbica (IL),
de camundongas com redução do transportador vesicular de acetilcolina (VAChT) avaliados
previamente na memória de reconhecimento de objetos (MRO) e esquiva discriminativa. Neste
estudo, foram utilizados encéfalos de camundongos da linhagem C57BL/6, selvagens (WT) e
geneticamente modificados para ter uma redução do transportador vesicular de acetilcolina
(VAChT Knockdown, VAChTKD) de 65% (KD HOMO) e 45% (KD HETERO) respectivamente,
considerados modelos para estudo da DA. Os animais foram tratados cronicamente com o EGb
(30 dias) e submetidos às tarefas: i) da esquiva discriminativa no labirinto em cruz elevado
modificado (PM-DAT), o que possibilitou avaliar memória aversiva de curto e de longo prazo, a
ansiedade, e a motricidade e, ii) memória de reconhecimento e de localização de objetos, ambas
caracterizadas por serem do tipo episódica. No trigésimo primeiro dia, ao término do tratamento e
testes comportamentais, os animais foram anestesiados e perfundidos para a retirada dos encéfalos,
que foram congelados e armazenados em freezer -80OC. Os encéfalos provenientes destes animais
foram seccionados em criostato (secções de 20µm) para análise da expressão diferencial dos
receptores colinérgicos α7 e M1 e de BDNF nas regiões PrL e IL. Para análise do número de
células imunorreativas para VAChT foram realizadas fotomicrografias bilateralmente em 4
subcampos de cada área (n=4/grupo) (fotomicroscópio Zeiss Imager A2); as células marcadas
foram contabilizadas utilizando o software Image J. A porcentagem do número de células IR foi
normalizada a partir dos dados do grupo Naïve. Para a análise estatística dos dados foi realizado
o teste de análise de variância ANOVA Two-way ou one-way, de acordo análise realizada, quando
necessário foram submetidos a teste post hoc Tukey no software GraphPad Prism 6. Foi
considerada a significância de