Efeitos fotobiomoduladores do laser de baixa potência na diferenciação condrogênica de células-tronco mesenquimais da medula óssea em sistema de cultura celular em 3 dimensões (3D)
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Data
2024-02-14
Autores
Silva, José Roberto Mateus da [UNIFESP]
Orientadores
Oliveira, Carlos Rocha
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
Células-tronco mesenquimais (CTM), são células com grande potencial de diferenciação em outros tipos celulares especializados. Podem ser obtidas a partir da medula óssea, dos tecidos adiposo e sinovial. As CTM apresentam a característica de serem cultiváveis in vitro, representando promissora fonte de regeneração e reparo de diferentes tecidos. Estudos têm demonstrado que o uso de Laser de Baixa Potência ou Low Level Laser Therapy (LLLT) têm capacidade de interagir com matrizes biológicas, promovendo reações fotoquímicas nas moléculas intra ou extracelulares, alterando suas funções biológicas e gerando novas respostas celulares/teciduais. Neste trabalho foi avaliada a influência da LLLT (2J/cm2 e 4J/cm2) na expressão de genes como o SOX9, HMOX1, SIRT1 e Aggrecan em culturas de CTM de camundongos, em 3 dimensões (3D), submetidas ao estímulo de meio diferenciador de condrócitos. O protocolo de estabelecimento da cultura em 3D permitiu a formação dos esferoides e a viabilidade celular, verificada pelo teste de MTT, indicou ausência de efeitos citotóxicos nestes aglomerados celulares. Embora todos os genes avaliados tenham apresentado aumento na sua expressão, quando submetidos à irradiação com a LLLT e comparados com o grupo controle, os genes SOX9 e HMOX1 foram os que mais apresentaram variações em relação aos níveis de RNAm e expressão proteica. Por outro lado, os genes SIRT1 e Aggrecan foram fracamente expressos. A microscopia por imunofluorescência revelou a presença das proteínas na população celular condicionada com meio diferenciador de condrócitos e estimulada com LLLT. Os resultados obtidos com a LLT em culturas primárias em 3D, derivadas de CTM murina, durante a diferenciação condrogênica, não foram acompanhados de citotoxicidade, além disso, foram observadas modulações positivas nos níveis de RNAm dos genes SOX9, HMOX-1, AGGRECAN e SIRT-1 e aumento da expressão proteica destes genes, que estão envolvidos na condrogênese. Dessa forma, concluímos que os resultados alcançados são relevantes, tanto para a pesquisa básica, como para as pesquisas clínicas, uma vez que, a busca por novas terapias celulares usando diferenciação de CTM em tipos específicos de células, como os condrócitos, vem se mostrando eficazes e revelando um baixo custo, como no caso da LLLT.