Emprego da cromatografia líquida de alta eficiência na determinação de cortisol sérico em substituição à técnica de radioimunoensaio

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dc.contributor.authorSugawara, Eduardo Kinio [UNIFESP]
dc.contributor.authorRibeiro Neto, Luciane Maria [UNIFESP]
dc.contributor.authorOliveira, Kelly Cristina de [UNIFESP]
dc.contributor.authorVerreschi, Ieda Therezinha do Nascimento [UNIFESP]
dc.contributor.institutionUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.date.accessioned2015-06-14T13:38:46Z
dc.date.available2015-06-14T13:38:46Z
dc.date.issued2008-10-01
dc.description.abstractBACKGROUND: The quantification of cortisol in different organic fluids has not only been applied to different human nosological conditions as a diagnostic aid but it has also been used in clinical research. In clinical application, cortisol is routinely measured by radioimmunoassay (RIA). In the determination of free urinary cortisol this technique has been replaced by the high-performance liquid chromatography mainly in the diagnosis of Cushing syndrome. As to serum cortisol determination, there is no evidence of the application of liquid chromatography as a substitute for other analytical techniques. OBJECTIVE: The development of an analytical methodology using reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) to determine serum cortisol levels as a substitute for RIA in order to reduce radioactive waste. MATERIAL AND METHODS: Cortisol was directly quantified by RP-HPLC in previously ether-extracted serum samples. Triamcinolone acetonide was used as internal standard (IS). The chromatographic separation was developed in a BDS-Hypersil-C18® column (125 x 4 mm, 5 µm) using water-acetonitrile (72:28; v/v) as mobile phase at 1 ml/min and steroid peaks were measured at 243 nm. RESULTS: Cortisol and IS presented retention time of 3.4 and 7.1 min, respectively. The precision was less than 10% and accuracy was less than 4%. DISCUSSION: The method was effective and efficient, with good sensitivity and linearity in the concentration range of 2.5 to 60.0 µµg/dl. CONCLUSION: The present methodology substitutes RIA at clinical application.en
dc.description.abstractINTRODUÇÃO: A determinação de cortisol nos diferentes fluídos orgânicos tem sido aplicada como auxílio diagnóstico em distintas condições nosológicas em humanos, bem como empregada em estudos envolvendo pesquisa clínica. No intervalo de aplicação clínica, rotineiramente é determinado pela técnica de radioimunoensaio (RIE). Na determinação do cortisol urinário livre essa técnica vem sendo substituída pelo emprego da cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), principalmente no diagnóstico da síndrome de Cushing. Já para a determinação do cortisol sérico não se têm evidências do emprego da cromatografia líquida em substituição a outras técnicas analíticas. OBJETIVOS: O desenvolvimento de metodologia analítica empregando HPLC no modo fase reversa (RP-HPLC) para a determinação de cortisol sérico em substituição ao RIE visando à redução da geração de resíduos radioativos. MATERIAL E MÉTODOS: O cortisol foi quantificado diretamente empregando-se RP-HPLC em amostras de soro previamente extraídas com éter utilizando-se acetonido de triancinolona como padrão interno (PI). Utilizou-se coluna analítica BDS-Hypesil-C18® (125 x 4 mm, 5 µm), fase móvel composta de água e acetonitrila (72:28; v/v) a 1 ml/min e detecção a 243 nm. RESULTADOS: O cortisol e o PI apresentaram tempo de retenção de 3,4 e 7,1 min, respectivamente. O coeficiente de variação (CV%) obtido no estudo da precisão foi menor que 10%, e a exatidão apresentou um desvio inferior a 4%. DISCUSSÃO: O método mostrou-se eficaz e eficiente, com sensibilidade e linearidade na faixa estudada de 2,5 a 60 µµg/dl. CONCLUSÃO: O método proposto substitui o RIE no intervalo de sua aplicação clínica.pt
dc.description.affiliationUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Escola Paulista e Medicina Departamento de Medicina
dc.description.affiliationEPM/UNIFESP Departamento de Medicina Laboratório de Esteróides
dc.description.affiliationUnifespUNIFESP, Escola Paulista e Medicina Depto. de Medicina
dc.description.affiliationUnifespEPM/UNIFESP, Depto. de Medicina Laboratório de Esteróides
dc.description.sourceSciELO
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
dc.format.extent337-342
dc.identifierhttp://dx.doi.org/10.1590/S1676-24442008000500005
dc.identifier.citationJornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial. Sociedade Brasileira de Patologia ClínicaSociedade Brasileira de PatologiaSociedade Brasileira de Citopatologia, v. 44, n. 5, p. 337-342, 2008.
dc.identifier.doi10.1590/S1676-24442008000500005
dc.identifier.fileS1676-24442008000500005.pdf
dc.identifier.issn1676-2444
dc.identifier.scieloS1676-24442008000500005
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/4602
dc.language.isopor
dc.publisherSociedade Brasileira de Patologia ClínicaSociedade Brasileira de PatologiaSociedade Brasileira de Citopatologia
dc.relation.ispartofJornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.subjectHPLCen
dc.subjectRadioimmunoassayen
dc.subjectCortisolen
dc.subjectTriamcinolone acetonideen
dc.subjectSteroidsen
dc.subjectHPLCpt
dc.subjectRadioimunoensaiopt
dc.subjectCortisolpt
dc.subjectAcetonido de triancinolonapt
dc.subjectEsteróidespt
dc.titleEmprego da cromatografia líquida de alta eficiência na determinação de cortisol sérico em substituição à técnica de radioimunoensaiopt
dc.title.alternativeHigh-performance liquid chromatography application for serum cortisol quantification as a substitute for radioimmunoassayen
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/article
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