Acao de BbKI e peptideos relacionados a sua estrutura em fungos e bacterias patogenicas
dc.contributor.author | De Caroli, Fernanda Peruzzo [UNIFESP] | |
dc.date.accessioned | 2015-12-06T23:02:57Z | |
dc.date.available | 2015-12-06T23:02:57Z | |
dc.date.issued | 2003 | |
dc.description.abstract | BbKI, inibidor de calicreina plasmatica humana de Bauhinia bauhinioides, apos extracao com solucao de NaCl 0,15M, foi purificado por fracionamento por sulfato de amonio, cromatografia de afinidade em coluna Con A Sepharose 4B (nao adsorvido), cromatografia de troca ionica DEAE-Sephadex A-50, HiTrap Q (sistema FPLC) e cromatografia de afinidade em coluna de tripsina-Sepharose. A analise da homogeneidade foi realizada em cromatografia de fase reversa em coluna C1$ (sistema HPLC), com gradiente de acetonitrila em 0,1 por cento de TFA. A sequecia N-terminal, de 25 residuos de aminoacidos, do BbKI apresentou a mesma sequencia primaria da proteina descrita anteriormente por Mendes,1998. Na determinacao do segmento N-terminal do BbKI, apos cromatografia de afinidade em coluna de tripsina-Sepharose, pode-se verificar e que a Arg na posicao 63 e o residuo de aminoacido da posicao P1 do sitio reativo. Eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida do inibidor mostra uma cadeia polipeptidica unica de massa molecular em torno de 20 kDa que nao apresenta mudancas apos reducao com 2-mercaptoetanol. A dimerizacao do BbKI foi confirmada por filtracao em gel em coluna Superdex 200 (sistema FPLC). A estrutura secundaria do BbK, por espectro (CD) apresentou 44 por cento de a-helice, 29 por cento de b-folha, 7 por cento de b-volta e 18 por cento de desordenada. O espectro tambem indicou a formacao de pontes dissulfeto. A inibicao de tripsina por BbKI ocorreu na razao molar 1:1 (enzima/inibidor)e confirmada pela curva de inibicao ajustada por um programa de comutador usando os valores experimentais indicados. A constante de dissociacao foi calculada como _20 nM. A atividade inibitoria tambem foi determinada para calicreina plasmatica humana (Ki = 4,7 nM) e a estequiometria da reacao foi de 2:1 (enzima/inibidor). A cidade inibitoria foi determinada para calicreina pancreatica de porco (Ki = 0,2 mM). Elastase pancreatica de porco nao foi afetada pelo inibidor. A acao inibitoria de BbKI sobre HuPK foi confirmada por radioimunoensaio. BbKI inibiu 69 por cento da atividade da HuPK na hidrolise do substrato natural o cininogenio humano de alta massa molecular. BbKI tambem inibiu a fracao enzimatica S-68 de Paracoccidioidoides brasiliensis sobre o cininogenio...(au) | pt |
dc.description.source | BV UNIFESP: Teses e dissertações | |
dc.format.extent | 130 p. | |
dc.identifier.citation | São Paulo: [s.n.], 2003. 130 p. | |
dc.identifier.file | epm-018636.pdf | |
dc.identifier.uri | http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18626 | |
dc.language.iso | por | |
dc.publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) | |
dc.rights | Acesso restrito | |
dc.subject | Inibidores de Proteases | pt |
dc.subject | Calicreínas | pt |
dc.subject | Fungos | pt |
dc.subject | Bactérias | pt |
dc.title | Acao de BbKI e peptideos relacionados a sua estrutura em fungos e bacterias patogenicas | pt |
dc.title.alternative | The effects of BbKI and peptides related to its structure on both pathogens yeast and bacteria | en |
dc.type | Dissertação de mestrado | |
unifesp.campus | Universidade Federal de São Paulo, Escola Paulista de Medicina | pt |