Isoformas da Heparanase na distincao entre o carcinoma diferenciado e as neoplasias benignas da tireoide
Data
2012
Autores
Matos, Leandro Luongo 
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Introdução: A distincao entre o carcinoma diferenciado da tireoide e outras lesoes benignas frequentemente necessita de avaliacao histologica. Na tentativa de aumentar a acuracia diagnostica, marcadores imunocitoquimicos e imuno-histoquimicos tem sido estudados, principalmente a citoqueratina-19 (CK-19), galectina-3 (Gal-3) e o antigeno mesenquimal Hector Battifora-1 (HBME-1). Entretanto, os resultados ainda sao controversos. A busca por um marcador especifico que possa auxiliar nessa diferenciacao e de grande interesse. Heparanase (HPSE) e uma endo-beta-glucuronidase envolvida no processo de invasao tumoral e a isoforma heparanase-2 (HPSE2) modula a atividade da HPSE. Objetivos: (1) estabelecer a acuracia diagnostica dos marcadores CK-19, Gal-3 e HBME-1, bem como de suas associacoes, na diferenciacao entre as lesoes malignas e benignas da tireoide; (2) avaliar o papel da heparanase no desenvolvimento das lesoes foliculares da tireoide e sua importancia diagnostica. Metodos: Foi realizada revisao sistematica de artigos publicados nas bases de dados MEDLINE e Cochrane. Depois de aplicados criterios de inclusao e exclusao, 66 artigos foram selecionados. A tecnica de meta-analise empregada foi de acuracia diagnostica e valores globais de sensibilidade, especificidade, area sob a curva ROC e odds ratio diagnostico (dOR) foram calculados. As expressoes de HPSE e HPSE2 por RT-PCR quantitativo (qRT-PCR), avaliacao imuno-histoquimica, analise por Western blot e determinacao da atividade enzimatica da HPSE foram inicialmente avaliadas em 27 especimes tumorais obtidos prospectivamente (15 lesoes malignas: carcinomas papilifero e folicular; 12 benignas: adenomas foliculares, nodulos hiperplasicos e tireoidite de Hashimoto). Posteriormente, foram selecionados 139 especimes emblocados em parafina (56 adenomas foliculares, 26 nodulos hiperplasicos e 61 carcinomas diferenciados da tireoide) os quais foram submetidos a analise imuno-histoquimica. Resultados: Quanto a revisao da tecnica de imuno-histoquimica, positividade de CK-19 no diagnostico de lesoes malignas apresentou sensibilidade global de 81% e especificidade de 73%; para a Gal-3, sensibilidade de 82% e especificidade de 81%; e para o HBME-1, sensibilidade de 77% e especificidade de 83%. A associacao dos tres marcadores apresentou sensibilidade de 85%, especificidade de 97% e odds ratio diagnostico de 95,1%. Resultados semelhantes foram obtidos para a tecnica de imunocitoquimica. A expressao das isoformas de heparanase por qRT-PCR evidenciou um aumento de HPSE2 no carcinoma diferenciado datireoide quando comparado as lesoes benignas (p=0,001, teste de Mann-Whitney); o mesmo foi observado para HPSE porem sem significancia estatistica (p=0,067, teste de Mann-Whitney). Foi demostrado que a atividade da HPSE foi maior nas neoplasias malignas (58,3 ± 6,2%) que nas lesoes benignas (32,4 ± 1,7%) (p=0,032, teste de Mann-Whitney). Os resultados de imunofluorescencia eterminaram intensidades de HPSE (p=0,039, teste de Mann-Whitney) e de HPSE2 (p=0,008, teste de Mann- Whitney) aumentadas nas lesoes malignas e tambem maior colocalizacao de ambas as isoformas (p=0,003, teste de Mann-Whitney) e menor colocalizacao de HPSE e heparam sulfato (p=0,039, teste de Mann-Whitney) no citoplasma das celulas malignas. Nao foi encontrada diferenca significativa na colocalizacao de HPSE2 e heparam sulfato (p=0,319, teste de Mann-Whitney). No metodo de Western blot, as isoformas de HPSE2 foram identificadas nas celulas de carcinoma papilifero de tireoide, e as isoformas 2a e 2c foram tambem identificadas na amostra de coloide. Ambas pro-enzima e enzima ativa da HPSE encontraram-se aumentadas no coloide e nas celulas neoplasicas do carcinoma papilifero. A marcacao imunohistoquimica claramente demonstrou que ha expressao de HPSE nas celulas foliculares de ambas as lesoes benignas ou malignas; por outro lado,a expressao de HPSE2 foi positiva nas celulas neoplasicas de todos os 61 carcinomas (100%) e tambem em 50 casos (64,1%) de lesoes benignas. A expressao de HPSE2 no coloide foi negativa em todos os 61 casos (100%) de carcinomas e em 31 especimes de lesoes benignas (39,7%). O presente estudo permitiu estabelecer um padrao imuno-histoquimico capaz de distinguir lesoes malignas e benignas. Enquanto carcinomas apresentam um padrao tipico de celulas neoplasicas positivas e coloide negativo para HPSE2, lesoes benignas apresentam preferencialmente outro padrao (p<0,0001, teste exato de Fisher). O teste diagnostico proposto baseado no padrao de imunomarcacao de HPSE2 apresentou sensibilidade de 100%, especificidade de 74,4%, valor preditivo positivo de 75,3% e valor preditivo negativo de 100%, com area sob a curva ROC de 87,2%. Conclusoes: A presente meta-analise demonstrou que os tres imunomarcadores estudados sao acurados na distincao entre as lesoes tireoidianas benignas e malignas no pre e pos-operatorio. Foi estabelecido que a atividade da HPSE e modulada pela HPSE2: HPSE e inibida pela HPSE2 no coloide de lesoes tireoidianas benignas, o que provavelmente nao esta acontecendo em lesoes malignas. A imunoexpressao de HPSE2 demonstrou ser um bom e acurado marcador no diagnostico do carcinoma diferenciado da tireoide
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Citação
São Paulo: [s.n.], 2012. 181 p.