Purificação e caracterização de uma proteína procoagulante presente nas cerdas da lagarta Lonomia obliqua

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dc.contributor.advisorSampaio, Claudio Augusto Machado [UNIFESP]
dc.contributor.authorReis, Cleyson Valença [UNIFESP]
dc.date.accessioned2015-12-06T22:59:54Z
dc.date.available2015-12-06T22:59:54Z
dc.date.issued1998
dc.description.abstractO objetivo deste estudo e a purificacao, caracterizacao e sequenciamento do N-terminal de um ativador de protrombina encontrado no veneno de Lonomia obliqua. Os extratos foram preparados pela maceracao em tampao salina-fosfato a frio e submetida a gel filtracao em Sephadex G75 em TRIS-HCl 50 mM, NaCl 100 mM, benzamidina 5mM pH8,0. A atividade das fracoes eluidas foram monitoradas pela capacidade de encurtar o tempo de recalcificacao do plasma humano. Apos dialise e concentracao, o pool das fracoes ativas fo i submetida a uma cromatografia de troca ionica (Resource Q) eluida com um gradiente linear (O-500 mM) ou submetida a uma fase reversa em HPLC (coluna C4) eluida com um gradiente linear de acetonitrila (O-IOO por cento ). Foi purificada uma proteina de 69 kDa com atividade procoagulante no fibrinogenio humano adicionado de fator 11. A proteina foi capaz de ativar fator II em ensaios com substrato cromogenico especifico, numa relacao de dose- dependencia, mas nao apresentou nenhuma atividade amidolitica. Esta ativacao fatores do complexo protrombina Fva e fosfolipidios), mas e potenciada por foi bloqueada pelo imunossoro especi fico produzido pelo 1. Butantan, PMSF, EDTA e ortofenantrolina. A sequencia N-terminal (DVVIDGACPDMKA VSKFDMNAYQGTWYEIKKFPVANEANGDCGSVE) apresenta 45 por cento de homologa com insecticianina (a) da hemolinfa de lagartas Manduca Sexta e de 48 por cento com um segmento interno de precurssores de apolipoprotelna D. Uma biblioteca de CDNA com um titulo de 108 pfu/gg DNA foi construida em um vetor lambda Zap (Stratagene) a partir de 9,1 mg de MRNA do extrato de cerdas de lagartas. A proteina isolada causa incoagulabilidade sa iiguinea em camundongos da mesma forma que o extrato bruto, sendo, provavelmente, responsavel pela forte atividade procoagulante nos pacientes com incoagulabllidade sanguineapt
dc.description.sourceBV UNIFESP: Teses e dissertações
dc.format.extent122 p.
dc.identifier.citationSão Paulo: [s.n.], 1998. 122 p.
dc.identifier.fileepm-015523.pdf
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/15855
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccess
dc.subjectProtrombinapt
dc.subjectCoagulantespt
dc.titlePurificação e caracterização de uma proteína procoagulante presente nas cerdas da lagarta Lonomia obliquapt
dc.title.alternativePurification and characterization of a procoagulant protein from bristles of Lonomia obliqua caterpillaren
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)pt
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