Caracterizacao de proteases, inibidores de proteases e uma proteina de reserva (cratilina) de sementes de Cratylia mollis

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dc.contributor.authorPaiva, Patricia Maria Guedes [UNIFESP]
dc.date.accessioned2015-12-06T23:00:01Z
dc.date.available2015-12-06T23:00:01Z
dc.date.issued1998
dc.description.abstractUma atividade endopeptidasica (Cm-endopepbdase), uma atividade aminopeptidasica (Cm-aminopeptidase), isoinibidores de tripsina (CmTIl e CmTI2) e uma proteina tipo vicilina (cratilina) foram isoladas e parcialmente caracterizadas de sementes de Cratylia moiiis. Cm-endopepbdase hidrolisa Bz-Arg-p-Nan e Ac-Phe-Arg-p-Nan, e termosenslvel, seu pH otimo de acao situa-se entre 7,5 e 8,0 e massa molecular estimada e 80.000. Eletroforese em gel de poliacrilamida, em presenca de DTT, revelou uma banda de massa molecular 45.000. Em cromatografia de fase reversa, em coluna de C-18, Cm-endopepddase apresentou um tempo de retencao de 24 minutos. A atividade em presenca de agentes quelantes, inibidores e reagentes grupos -SH indica que a enzima e uma serinoproteinase que pode depender de metal e talvez tenha um grupo SH importante para a sua estrutura. A hidrolise de Bz-Arg-p-Nan foi estudada em presenca de metais e foi apenas parcialmente inibida por ions de zinco. A preparacao de Cm-endopepbdase apresentou atividade proteolitica sobre caserna e hidrolisou a ligacao Phe-Ser da bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina; TPCK inibiu parcialmente a hidroiise de bradicinina. Cm-amjnopepddase hidrolisa preferencialmente Leu-b-Na e, semelhante a endopeptidase, e termosensivel, o pH otimo de acao situa-se na faixa de pH alcalino, e ocorre com massas moleculares de 80.000 e 45.000, na ausencia e na presenca de agente redutor, respectivamente. A cromatografia de fase reversa en coluna de C-18 revelou que a enzima e mais hidrofobica que Cm-endopepbdase, sendo eluida aos 30 minutos. A atividade aminopeptidasica foi parcialmente inibida por bestatina e puromicina e foi sensivel a metais, sendo totalmente abolida em presenca de zinco e parcialmente inibida com calcio, cobalto, magnesio e manganes. CmTI isolado por diferentes procedimentos, inclusive cromatografia em tripsina-Sepharose, e estavel na faixa de pH de 2,0 a 10,0 e em diferentes temperaturas. Da cromatografla de gel filtracao foi isolado o dimero do inibidor, com massa molecular 21.000. A eletroforese em gel de poliacrilamida revelou que o monomero tem massa molecular 11.000. Da cromatografia de fase reversa foram isoladas duas formas do inibidor e cujas estruturas primarias apresentaram alta homologia entre si mesmas e com inibidores da familia Bowman-Birk. Em relacao a sitios reativos, os isoinibidores diferem apenas quanto ao segundo sitio...(au)pt
dc.description.sourceBV UNIFESP: Teses e dissertações
dc.format.extent151 p.
dc.identifier.citationSão Paulo: [s.n.], 1998. 151 p. ilustab.
dc.identifier.fileepm-015653.pdf
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/15976
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccess
dc.subjectSerina Proteasespt
dc.subjectInibidores de Proteasespt
dc.subjectSequência de Aminoácidospt
dc.subjectSementespt
dc.titleCaracterizacao de proteases, inibidores de proteases e uma proteina de reserva (cratilina) de sementes de Cratylia mollispt
dc.title.alternativeCharacterization of protease, protease inhibitors and a storage protein (cratilin) from Cratylin mollis seedsen
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis
unifesp.campusUniversidade Federal de São Paulo, Escola Paulista de Medicinapt
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