Caracterizacao molecular e variabilidade da regiao espacadora transcrita interna (ITS) do gene ribossomal de isolados de Candida spp. de interesse medico
Nenhuma Miniatura disponível
Data
2012
Autores
Merseguel, Karina Bellinghausen [UNIFESP]
Orientadores
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
As infeccoes invasivas por Candida nao-C. albicans tem emergido como problemas de Saúde publica mundial. A identificacao correta de Candida spp. e fundamental para a definicao de estrategias de controle e tratamento das infeccoes fungicas. Nosso objetivo foi avaliar as taxas de concordancia da identificacao de isolados de Candida spp. por metodos fenotipicos e por metodo molecular, assim como caracterizar variabilidades intra e interespecificas da regiao ITS (Internal Transcribed Spacer) do DNA ribossomal (rDNA). Selecionamos 300 cepas de Candida spp. depositadas no Banco de Microrganismos do Laboratorio Especial de Micologia u LEMI (UNIFESP), no periodo de 1997 a 2011, isoladas de pacientes com candidemia ou de pacientes HIV positivos/AIDS com candidiase oroesofagica. A identificacao fenotipica foi realizada por cultivo em meio CHROMagarTM Candida, micromorfologia e perfil bioquimico (ID32C), complementada por teste de tolerancia em caldo hipertonico e temperatura de 42° C quando pertinente. A identificacao molecular foi realizada atraves do sequenciamento da regiao ITS do rDNA e as sequencias obtidas foram comparadas as sequencias depositadas nos bancos genomicos publicos do National Center for Biotechnology Information (NCBI) and Centraalbureau voor Schimmelcultures (CBS). Para identificacao correta em nivel de especie, consideramos a identidade maxima  a 98%. Para analise das variabilidades intra e interespecificas da regiao ITS, calculamos a diversidade dos haplotipos e a distancia p nao corrigida. Houve concordancia entre a identificacao fenotipica e molecular para 87% dos isolados de Candida spp. analisados. Com o metodo molecular foi possivel discriminar as especies do complexo C. parapsilosis (n=69), sendo 34 isolados de C. parapsilosis (sensu stricto), 31 C. orthopsilosis, 3 C. metapsilosis e 1 isolado de Lodderomyces elongisporus. Resultados discrepantes tambem foram observados para outros isolados de Candida spp.: um isolado foi identificado fenotipicamente como C. guilliermondii e molecularmente como P. caribbica, enquanto tres isolados que tiveram perfil duvidoso na identificacao fenotipica pelo sistema ID32C foram identificados como C. haemulonii pelo metodo molecular. Na analise da variabilidade intraespecifica da regiao ITS, identificamos diferentes haplotipos entre 11 especies de Candida, observando-se maior polimorfismo na regiao ITS1 e maior numero de haplotipos entre as especies relacionadas a fontes endogenas de aquisicao de infeccao. A analise da distancia u p nao corrigida mostrou que as distancias intraespecificas sao manifestamente menores que as distancias interespecificas. Concluimos que os metodos fenotipicos, quando realizados por profissionais experientes em micologia, permitem a identificacao correta das especies de Candida de maior prevalencia clinica. O metodo molecular possibilitou diferenciar as especies do complexo C. parapsilosis e especies raras consideradas emergentes. A analise do polimorfismo da regiao ITS do rDNA indicou diferentes padroes de variabilidade genetica entre as especies de Candida, demonstrando sua utilidade como marcador genetico para identificacao de especies e tambem para estudos evolutivos, assim como para inferencias sobre a historia natural das infeccoes hematogenicas causadas por leveduras do genero Candida de importancia medica
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2012. 124 p.