Vacinação com DNA recombinante: imunização de camundongos com o gene que codifica a GP82 de formas metacíclicas de Trypanosoma cruzi.
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Data
1999
Autores
Boscardin, Silvia Beatriz [UNIFESP]
Orientadores
Silveira, Jose Franco da [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
As formas metaciclicas do Trypanosoma cruzi(T cruzi) expressam uma glicoproteina de superficie de 82 kDa que esta envolvida na penetracao dos parasitas dentro das celulas hospedeiras. A imunizacao com a gp82 recombinante protegeu camundongos contra o desafio com o T cruzi. Para determinar se uma resposta imune protetora semelhante poderia ser conseguida pela imunizacao com DNA, a fase de leitura aberta (ORF) da gp82 foi subclonada no vetor de expressao de mamiferos pcDNA3 (InvitroGen), criando o pc-gp82. Paralelamente, nos inserimos o peptideo sinal da hemaglutinina do virus da gripe em fase com a ORF da gp82, criando outra construcao denominada pc-gp82+PS. Ambas as construcoes foram transientemente transfectadas em celulas de mamiferos e, apenas a gp82 codificada pela construcao pc-gp82+PS foi N-glicosilada. Grupos de camundongos BALB/c foram imunizados com o plasmidio pc-gp82, pc-gp82+PS ou com o plasmidio pcDNA3 nao recombinante. Cada camundongo recebeu quatro doses de 100 µg de DNA intramuscularmente ou intradermicarnente no musculo tibialis anterioris, com intervalos de tres semanas. Diferencas significativas nos titulos de anticorpos anti-gp82 foram observadas nos grupos pc-gp82 e pc-gp82+PS quando comparadas aos controles imunizados com o pcDNA3. A analise do perfil de imunoglobulinas indicou a predominancia de IgG1, IgG2a e IgG2b. Os animais imunizados intramuscularmente com o plasmidio pc-gp82+PS apresentaram celulas linfoides que proliferaram in vitro na presenca da proteina gp82 recombinante. Cada grupo de animais foi desafiado com 105 formas metaciclicas da cepa CL de T cruzi e nenhuma protecao significativa foi conseguida. Como nos nao conseguimos a protecao esperada contra a fase aguda da doenca de Chagas usando os plasmidios pc-gp82 ou pc-gp82+PS, nos subclonamos a gp82 mais o peptideo sinal no plasmidio pCI (Promega) gerando a construcao denominada pCI-gp82+PS. Grupos de camundongos BALB/c foram imunizados intramuscularmente com a nova construcao e comparados com os pc-gp82+PS. Camundongos imunizados com o plasmidio pCI-gp82+PS induziram niveis de anticorpos superiores aquelas imunizados com o plasmidio pc-gp82+PS. Celulas linfoides destes camundongos proliferaram in vitro na presenca da gp82 recombinante como proliferaram as celulas retiradas dos camundongos imunizados com o pc-gp82+PS. Quando os animais imunizados com o pCI-gp82+PS foram desafiados com tripomastigotas metaciclicos da cepa CL, eles foram protegidos ...(au)
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 1999. 122 p. ilus., tab.