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- ItemSomente MetadadadosAnálises do perfil antioxidante enzimático e de produtos da peroxidação lipídica em amostras seminais de pacientes portadores de câncer de testículo(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013-10-30) Sposito, Camila [UNIFESP]; Spaine, Deborah Montagnini Spaine [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Introdução: O tumor de testículo, associado à orquiectomia, pode causar modificações no ambiente testicular, como estresse oxidativo, resultando em redução do potencial fértil destes pacientes. Objetivo: Verificar se os níveis de antioxidantes enzimáticos e de produtos da peroxidação lipídica diferem entre pacientes com tumor de testículo, previamente orquiectomizados, e indivíduos controles sadios e sem tumor de testículo. Métodos: As amostras seminais foram obtidas de 52 homens jovens, com faixa etária entre 18 e 45 anos, sendo 14 diagnosticados como tumor não seminomatoso e 12 como tumor seminomatoso. O grupo controle foi formado por 26 pacientes voluntários do Ambulatório de Urologia, sem tumor de testículo. Após a orquiectomia, os pacientes com tumor foram encaminhados para criopreservação de espermatozoides ao Banco de Células e Tecidos Germinativos (BCTG) do Setor de Reprodução Humana da Disciplina de Urologia da UNIFESP. Inicialmente, uma análise seminal foi realizada pela equipe do Setor de Reprodução Humana de acordo com os critérios da Organização Mundial da Saúde e morfologia pelo critério estrito. Uma alíquota foi separada antes da criopreservação para realização deste estudo. A amostra foi centrifugada para o armazenamento do plasma seminal. Foram analisados os níveis das enzimas antioxidantes catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e superóxido dismutase (SOD), por métodos colorimétricos indiretos, e os níveis de peroxidação lipídica através da técnica de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), utilizado como um índice de estresse oxidativo. Todas as análises foram mensuradas em espectrofotômetro. Os dados foram analisados pela análise de variância (ANOVA) através do programa SAS System 2000 para Windows, através do aplicativo Guided Data Analisys. Resultados: Na análise seminal, foram observadas redução da concentração, contagem total e morfologia normal de espermatozoides nos grupos seminoma e não seminoma quando comparados ao grupo controle (p<0,0001). Os grupos seminoma e não seminoma apresentaram aumento dos níveis de TBARS/espermatozoides (p<0,001), porém, sem alterações nos níveis das enzimas antioxidantes glutationa peroxidase (GPx) e superóxido dismutase (SOD) e do TBARS (p>0,05). A CAT não foi mensurada devido ao seu consumo rápido em estudos in vitro. Adicionalmente, foram encontradas correlações (p>0,05) entre os níveis de TBARS e concentração de espermatozoides e SOD e contagem total no grupo seminoma; TBARS e abstinência e contagem total no grupo não seminoma, Conclusão: Pacientes com tumor de testículo apresentaram aumento de estresse oxidativo no sêmen, porém, sem diferenças nos níveis de antioxidantes, mesmo após orquiectomia, sugerindo que um aumento da geração de produtos oxidativos ocorra nestes pacientes.
- ItemSomente MetadadadosO impacto da obesidade sobre a qualidade funcional dos espermatozoides e os mecanismos proteômicos do sêmen(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-11-30) Ferigolo, Paola Cristine [UNIFESP]; Fraietta, Renato Fraietta [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Purpose: To evaluate the effect of obesity on the sperm function and seminal plasma proteome. Methods: A prospective study was performed including 47 male volunteers, of which 27 participated in the obese group (BMI ? 30 kg / m2) and 20 in the control group (? 18.5 and BMI <25 kg / m2). After semen retrieval by masturbation, an aliquot was used for semen analysis and another for evaluation of the main functional characteristics of sperm. Mitochondrial activity was determined by a colorimetric stain (3,3?-diaminobenzidine - DAB) and classified as DAB I (all mitochondria active) to DAB IV (all mitochondria inactive); acrosome integrity was determined by a fluorescent probe (PNA-FITC) and assessed by fluorescent microscopy; and sperm DNA fragmentation was assessed by an alkaline Comet assay, in which sperm were classified as high DNA integrity (class I) to high DNA fragmentation (class IV). The remaining semen volume was centrifuged and the supernatant seminal plasma was utilized for proteomic analysis by LC-MS/MS. Groups were compared by an unpaired Student?s t test. Differentially expressed proteins were subsequently used for functional enrichment analysis of Gene Ontology categories using the online platform PantherDB. Results: Significant diferences were observed in sperm non-progressive motility (p = 0.018), morphology (p = 0.028), PNA-FITC (p <0.0001), DAB I (p = 0.0001), DAB III (p = 0 , 0017), IV DAB (0.026), DAB (p = 0.0003), Comet III (p = 0.001), and Comet (p = 0.003). In proteomics analysis, a total of 489 proteins were quantified and identified, in which 73 are differentially expressed between the two groups and 416 proteins are conserved. Among the differentially expressed proteins, 1 protein was absent, 19 were down-regulated, 49 were up-regulated and 4 were exclusive in the study group. The main functions enriched in the obesity group were negative regulation of the intrinsic pathway of apoptosis, regulation of phagocytosis, endocytosis regulation, regulation of proteolysis, endopeptidase inhibitory activity, activation of immune and inflammatory and antioxidant activity. The functions depleted in the obesity group were the following: regulation of metabolic process, regulation of response to stimulus and regulation of cellular process. Conclusions: Based on our findings, obesity may affect semen quality and sperm function. There is a significant change in the proteome of the seminal plasma of men with excess weight that elucidates some processes involved in infertility of these men, such as excessive production of reactive oxygen species, endocrine disorders, testicular hyperthermia, exacerbated immune response, inflammatory response, inhibiting phospholipase and changes in apoptotic pathway.