Navegando por Palavras-chave "enzima conversora de angiotensina"
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- ItemSomente MetadadadosCaracterização fisiopatológica do sistema renina-angiotensina durante o status epilepticus induzido pela pilocarpina em camundongos transgênicos que expressam tonina de rato(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013-12-20) Iha, Higor Alves [UNIFESP]; Mazzacoratti, Maria da Graca Naffah Mazzacoratti [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Objectives: To evaluate the influence of pilocarpine induced long-term convulsive seizure in transgenic mice with overexpressed plasma and brain Ang II. Methods: Using a 320mg/kg pilocarpine dose to induce SE. Following the injection protocol of CAVALHEIRO (1995). We conducted an investigation of both strains (TGM (rTon) and WT C57Black/6) of the following groups: a) saline group; b) 3 hour in SE group; and c) Tonic-clonic seizure group. The last group was created upon the greater incidence of such crises in rTon when compared with WT. During the SE, we accessed several parameters such as latency for the first seizure, tonic-clonic seizure susceptibility and mortality. In their hippocampi was assessed by western-blot, real-time RT-PCR, respectively, protein and RNAm expression levels of AT1, AT2, B1 and B2 receptors as well as of the ACE ACE2, iNOS and eNOS enzymes. The same was made to AT1 receptor in heart. It was also assessed the enzymatic activity of hippocampal, cardiac and plasmatic ECA. Results: In an assessment of how both strains reacted to the pilocarpine induced SE we found no difference on first seizure latency time, but a significant higher frequency of death during the generalized tonic-clonic seizure in rTon mice, 66% in rTon and 34% in WT. In RAS, KKS and NO analyzed parameters we found in studied mice groups strain comparison that rTon showed: a) Saline group: in mRNA hippocampal expression, greater transcript level for iNOS and lower for B1 receptor, in protein quantifying, greater for hippocampal AT1 receptor and lower for cardiac AT1 receptor, thereafter, on ECA enzymatic activity evaluation, greater in hippocampi and heart a and on ACE activity, in heart on AT1 receptor protein levels and in plasma on ACE activity; b) in Tonic-Clonic group: mRNA levels were reduced transcripts of eNOS and iNOS, protein quantification showed raised in hippocampi raised ECA2 and lowered B1 receptor and in heart raised AT1 receptor, thereafter, in ECA enzymatic activity assessment, increased in hippocampal and in plasmatic forms. c) 3h of SE group: in hippocampi mRNA levels were upkeeped for ECA transcript, raised for ECA2 and eNOS transcript and reduced for iNOS transcript, protein analysis showed greater raised hippocampal and heart AT1 receptor and hippocampal lowered B2 receptor. Thereafter, on ECA enzymatic activity evaluation, showed raised activity on hippocampal and plasmatic forms. Conclusion: Transgenic mice showed in assessed tissues differences on RAS, KKS and iNOS expression. These differences resulted in a differentiated response to pilocarpine induced seizure in RAS, KKS, iNOS and eNOS which culminated in a greater propensity to tonic-clonic seizures and greater frequency of death throughout the SE, but didn´t affected the latency period for the first seizure.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Influência do número de cópias do gene da ECA sobre o desenvolvimento da nefropatia em camundongos diabéticos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014-07-31) Bertoncello, Nadia de Sousa da Cunha [UNIFESP]; Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Nos últimos anos, grande esforço tem sido direcionado não só ao entendimento do genoma humano, mas também à investigação de genes candidatos que possam influenciar o desenvolvimento ou progressão de desordens humanas freqüentes e complexas, como o diabetes melito (DM). Sabe-se que a nefropatia diabética (ND) acomete 30-50% dos pacientes diabéticos tipo 1, e aproximadamente 10-40% dos diabéticos tipo 2. A hiperglicemia crônica não é a única causa responsável pelas complicações renais; fatores genéticos desempenham importante papel. Estudos populacionais em famílias já demonstraram associação entre ND e o polimorfismo de inserção / deleção (I/D) no íntron 16 do gene da enzima conversora de angiotensina I (ECA), resultando em diferenças nas concentrações plasmática e tecidual de ECA (I/I, 76%; I/D, 100%; D/D, 126% em média). Além disto, o sistema renina angiotensina (SRA) e o sistema calicreína cinina (SCC) podem ser ativados pela hiperglicemia. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a modulação exercida pelo número de cópias do gene da ECA associado ao DM, sobre a expressão, atividade e balanço entre os componentes dos sistemas renina angiotensina renal, e correlacionar com indicadores de função renal, ao final de 12 semanas de protocolo experimental. Os resultados do presente estudo mostram que o aumento do número de cópias do gene da ECA, associado ao DM induz disfunção renal significativa, evidenciada por alterações morfológicas e funcionais do órgão. A susceptibilidade para o desenvolvimento da ND, apresentada pelos animais 3-cópias, está associada a um desequilíbrio da atividade de diversas enzimas do SRA (renina, ECA e ECA2) levando ao aumento da síntese de Ang II e principalmente de Ang-(1-7). Este aumento da concentração renal de Ang-(1-7) parece potencializar o efeito deletério desencadeado pela Ang II sobre a estrutura e função renal. Além do envolvimento do SRA no desenvolvimento da ND, nossos resultados também mostram importante participação do SCC, evidenciado pelo aumento da bradicinina apenas no grupo 3-cópias diabético. Em conjunto, estas alterações mostram-se extremamente relevantes para o desenvolvimento da ND no grupo 3-cópias diabético, e estão associadas ao significativo aumento da taxa de mortalidade do grupo. Em suma, estas adaptações indicam que os efeitos deletérios desencadeados sobre a função renal dos animais 3- cópias diabéticos são, ao menos em parte, decorrentes de uma combinação de fatores não usualmente descrita na literatura científica. Desta forma, os dados aqui apresentados mostram-se inovadores e contribuem na busca pelo entendimento dos complexos mecanismos envolvidos no desenvolvimento da ND, com vistas à otimização do tratamento dos pacientes acometidos por esta complicação.
- ItemSomente MetadadadosProcessamento e solubilização das isoformas com 65 e 90 kda da enzima conversora de angiotensina i (eca) nas células mesangiais(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013-10-30) Aragao, Danielle Sanches [UNIFESP]; Casarini, Dulce Elena Casarini [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)A ECA é uma zinco dipeptidil carboxipeptidase envolvida na regulação da pressão arterial e na homeostase eletrolítica e de fluidos. Apresenta-se sob as formas somática e germinal, ambas transcritas a partir de um único gene e descritas como proteínas transmembranicas tipo I e que são proteoliticamente processadas próximas à membrana plasmática, na porção extracelular, sendo seus domínios ativos C e N liberados da superfície celular pela ação de secretases ou sheddases ainda não descritas na literatura. Suas isoformas solúveis N-domínio foram descritas apresentando 108 kDa (68 kDa na forma deglicosilada) no fluido ileal, outra com 90 kDa, presente em tecidos, células mesangiais (CMs) e urina de ratos SHR e com 65 kDa, presente em tecidos, CMs primárias ou imortalizadas, proximais, células IMCD e urina de ratos normotensos (Wistar). Uma vez que as CMs apresentam as formas somática e solúveis N-domínio da ECA e constituem-se um modelo experimental adequado ao estudo do processo de shedding dessa enzima, o objetivo deste estudo foi investigar a existência de uma ou mais secretases que possam atuar na hidrólise da ECA de alta massa molecular (somática), originando então as isoformas N-domínio com 90 e 65 kDa nestas células. Neste estudo, foram utilizadas culturas de CMs imortalizadas de camundongo e primárias de ratos SHR, cujos lisados celulares foram purificados separadamente com a utilização dos substratos fluorogênicos construídos a partir da clivagem C-terminal da ECA somática para as possíveis enzimas responsáveis pela geração das isoformas solúveis N-domínio: S1 para secretase geradora da ECA com 65 kDa (Abz- RWGVFSGRTPQ-EDDnp) e S2 para a secretase geradora da ECA com 90 kDa (Abz- EYQWHPPLPDNYQ-EDDnp). Foram obtidos dois pools cromatográficos no processo de purificação para o lisado de ambas as culturas, sendo que o número 2 apresentou maior atividade sobre os substratos, tendo o conteúdo proteico posteriormente analisado e sequenciado, levando à identificação de serino proteases. A Matriptase-3, com massa molecular de 80 kDa, foi a enzima identificada com homologia às serino proteases SH1 (48kDa) e STH2 (60 kDa, semelhante à Matriptase-3), purificadas de urina humana e que foram capazes de clivar a ECA somática e gerar isoformas com 65 e 90 kDa. O pool 2, oriundo da purificação da CMI, foi capaz de clivar a ECA somática gerando uma isoforma com 65 kDa. Estes resultados sugerem que as isoformas Ndomínio da ECA, com massas moleculares de 65 e 90 kDa, são geradas a partir de diferentes serino proteases presentes nas CMs de animais normotensos e hipertensos e que, provavelmente, possuem modulações distintas nesses modelos experimentais, uma vez que a isoforma com 90 kDa está presente somente em animais e indivíduos com hipertensão ou predispostos geneticamente ao desenvolvimento dessa patologia.