Navegando por Palavras-chave "Retroviridae"

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    Auto-estimulação do crescimento dos querratinócitos após transdução com o gene EGF (Epidermal Growth Factor) por vetores retrovirais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1999) Choudhuri, Jomuna Veronica [UNIFESP]; Han, Sang Won [UNIFESP]
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    Estudo da transmissao materno fetal do virus linfotropico de celulas T humanas do tipo II em um grupo indigena kaiapo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1999) Novoa, Patricia Correia Rodrigues [UNIFESP]
    HTLV-11 infection has been shown to be endemic in a number of indigenous populations in North, Central, and South America. Previous studies on small numbers of Guaymi lndians, in Changuinola, Panama, have indicated there might also be groups with endemic infection in that country. Several of the southern American Indian populations have documented a high seroprevalence rates suggesting that there are foci of endemic infection in the Amazon region.The existence of infection with Human T Lymphotropic Virus Type II has been recently demonstrated among the Kaiapo indians. The modes of transmission of HTLV-1 and II are generally similar to those of Human Immunodeficiency Virus (HIV) and include mother-to-child transmission by blood transfusion and among intravenous drug users and sexual intercourse. in the present study, we have employed serological and molecular methods to estimate the rate of mother-to-child transmission of HTLV-II in Kaiapo Indians from Xingu Nacional Park in the northern region of Brazil. Sera (238) from two lndian groups were collected in January 1996 and analyzed by ELISA and Western Blot. One hundred and nine samples were reactive by both technics, showing a seroprevalence rate of 45,7 por cento. Of these, twenty nine samples were from mothers and fifty three from their children. Among children with ages between 18 months and 12 years, 47,5 por cento Vertical transmission is an important route of infection. HTLV-11 has alredy been detected in breast milk of infected mothers and there has been one reported case where transmission of HTLV-11 appears to have directly resulted from breast feeding
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    Expressão dos genes hGH (hormônio de crescimento humano) e LacZ (Beta-galactosidade) por longo período pelas células musculares lisas vasculares, transduzidas por vetores retrovirais, implantadas na adventícia vascular de ratos: estabelecimento de um novo modelo de terapia gênica ex vivo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Braga, Patricia Cristina Baleeiro Beltrao [UNIFESP]; Han, Sang Won [UNIFESP]
    A proximidade dos vasos sanguineos torna as celulas musculares lisas vasculares(CML) ideais para a terapia genica sistemica. Alem disso, essas celulas tem proporcionado expressao de genes exogenos in vivo por longos periodos. Entretanto, o procedimento usualmente empregado para semear CML transduzidas em arterias desnudas de celulas endoteliais, frequentemente induz a estenose vascular, consequentemente com alto risco para uso em humanos. Nesse trabalho, demonstramos que a adventicia vascular e um local susceptivel para introduzir CML transduzidas para secretar proteinas na corrente sanguinea atraves de um simples procedimento, evitando as complicacoes vasculares pos-operatorias. As CML transduzidas com o vetor retroviral L(GH6)SN, o qual carrega o gene do hormonio do crescimento humano (hGH), foram semeadas na regiao adventicia da porcao abdominal da arteria aorta de ratos atraves da simples injecao da suspensao celular. Baseados na producao de HGH e anticorpos anti-hGH no soro, nos demonstramos que houve producao de hGH por um periodo de, aproximadamente, 2 meses. A expressao genica por um longo periodo tambem foi demonstrada usando o gene bacteriano da enzima b-galactosidase (LacZ). Nos cortes histologicos da aorta, apos coloracao com o cromogeno X-Gal, foram observadas varias celulas azuis na adventicia vascular por, pelo menos, 11 semanas. Em relacao ao vetor construido com o gene hGH sob o controle do promotor da metalotioneins humana (hPMT), verificamos producao de hGH somente por alguns dias in vivo, o qual foi ativado por Zn2+. Com o nosso procedimento de implante celular, nao observamos estenose, trombose ou outras anormalidades vasculares ou fisiologicas em nenhum dos animais experimentados. Esse modelo de transferencia genica ex vivo - Introdução de celulas modificadas em um local que nao e o de sua origem - poderia ser realizado em vasos perifericos de animais de maior porta atraves da simples injecao da suspensao celular. Este procedimento nos permite introduzir um grande numero de celulas modificadas para a producao da quantidades suficientes de proteinas a terapia
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    Transferência do gene bsr [Gene de resistência a blasticidina-s] por meio de vetor retroviral: mutações na região do códon de iniciação levaram a superexpressão
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1997) Freitas, Antonio Carlos de [UNIFESP]; Han, Sang Won [UNIFESP]
    A Introdução de um DNA exogeno em uma celula de mamifero em cultura e a identificacao posterior das celulas transfectadas ou transduzidas, atraves de um marcador seletivo, e um passo fundamental nos protocolos de transferencia genica mediada por retrovirus. A blasticidina-S (BS) e um antibiotico nucleosidico produzido pela Streptomyces griseochromogenes, que inibe especificamente a sintese proteica, tanto em procariotos como em eucariotos. A acao inibitoria da BS pode ser controlada pela blasticidina-S desaminase (bsr), que converte a BS no derivado desaminohidroxila. O gene estrutural do bsr foi isolado do Bacillus cereus cepa K55-S1 e sua ORF e aproximadamente 420pb. Inicialmente, nos demonstramos por meio de vetores retrovirais construidos com o gene bsr (pLBSN e pLNSB),que as celulas transfectadas podem ser selecionadas em 8 dias utilizando 2µg/ml de BS. Ainda que este resultado seja comparavel ao resultado das celulas transfectadas com o gene neo e selecionadas com 500µg/ml de geneticina (G418), nos tentamos aumentar a expressao do gene bsr provocando mutacoes na regiao do codon de iniciacao. Desta forma, teriamos uma selecao rapida utilizando altas concentracoes de BS. Nosso objetivo principal era obter retrovirus recombinantes resistentes a BS para serem usados nos protocolos de terapia genica, porem, com os vetores construidos anteriormente, apenas poucos clones resistentes puderam ser observados. As mutacoes foram introduzidas no gene bsr atraves da tecnica PCR (terminal end PCR mutation technique) e o mutante denominado, bsr1. Os vetores LB1SN e LNSB1, que contem o gene bsr1 sob o controle do promotor e enhancer do retrovirus LTR ou do virus SV40, foram transfectados em celulas NIH3T3 e sua expressao analisada por Northern blot, atividade da enzima BS desaminase e ensaio de formacao de colonias. As celulas transfectadas com LB1SN tiveram que ser selecionadas com 4 ou 8µg/ml de BS contra 2µg/ml para LBSN e pSV2bsr, devido ao rapido crescimento das celulas resistentes. Esta alta resistencia tornou-se compreensivel, ao compararmos os niveis de mRNA transcrito e a atividade enzimatica. A atividade enzimatica aumentou cerca de 4 e 14 vezes comparando-se LB1SN com LBSN e pSV2bsr, respectivamente, sugerindo um maior efeito das mutacoes induzidas no processo de traducao. Quando estes vetores foram transduzidos em das celulas empacotadoras anfotropicas (PA317), somente LB1SN mostrou resistencia contra BS. Consequentemente, as outras linhagens foram selecionadas com geneticina. Os niveis de mRNA do bsr1 nos clones de PA317/LB1SN foram ligeiramente mais elevados do que os de bsr nos clones de PA317/LBSN, o que nao explica a alta resistencia do LB1SN em relacao ao LBSN. Alguns clones de PA317/LB1SN apresentaram alta atividade da BS desaminase (~6000U) e outros, ao redor de 1000U. Curiosamente, alguns clones das celulas selecionadas com geneticina (LBSN, LNSB e LNSB1) tambem mostraram alta atividade enzimatica. Porem, quando os clones celulares com mais de 1000U de atividade enzimatica foram incubados em meio com BS, somente as celulas derivadas de LB1SN cresceram normalmente, e as outras morreram em 5 dias. Deste modo, verificamos que a alta resistencia ao antibiotico BS promovida pelo mutante bsr1 comparado ao bsr, e principalmente ao aumento da biossintese da enzima blasticidina-S desaminase do que da transcricao genica