Navegando por Palavras-chave "Resposta imune humoral"

Agora exibindo 1 - 2 de 2
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação da imunogenicidade de vacinas de DNA e de proteínas recombinantes do envelope dos vírus chikungunya e zika
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-05-24) Amaral, Marcelo Pires [UNIFESP]; Rosa, Daniela Santoro [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1472798853821902; http://lattes.cnpq.br/1246712263704416; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Chikungunya (CHIKV) and Zika (ZIKV) viruses’ infection have rapidly enhanced worldwide in the last decades. To date, there is no vaccine available or specific treatment against both viruses. The viral envelope proteins of CHIKV and ZIKV are the main immunodominant antigens of the viruses and have a crucial role during the infection in host cells. Furthermore, E2CHIKV and EZIKV are the main target of neutralizing antibodies against the respective viruses. In this work, we designed and optimized synthetic genes encoding E2CHIKV and EZIKV proteins, subcloned into pVAX1 vector to obtain the DNA vaccines (pVAX-E2CHIKV and pVAX-EZIKV) and purified using Endofree Plasmid Giga kit (Qiagen). The recombinant proteins E2CHIKV and EZIKV were produced as inclusion bodies in BL21(DE3) and BL21(DE3)RIL (respectively), then purified by affinity chromatography. The immunization strategies were performed with the homologous/heterologous prime-boost regimen, 15 days apart, with 100 μg (100 μL final volume) of the DNA vaccines (i.m.) pVAX-E2CHIKV or pVAX-EZIKV or with 10 μg (200 μL final volume) of the recombinant proteins (s.c.) E2CHIKV or EZIKV in the presence of different adjuvants (50 μg poly IC, 20 μg imiquimod or 10 μg CpG) inoculated in 6-8 weeks old female mice, C57BL/6 mice for the vaccines against CHIKV and BALB/c mice for the vaccines against ZIKV. All mice were bled 14 days after each immunization to evaluate specific humoral response, and euthanized 15 days after the last dose to collect spleen and popliteal and inguinal lymph nodes to evaluate specific cellular response. All procedures were performed in accordance to the guidelines of the UNIFESP’s Ethics Committee and approved under protocol number 5759150416. Among all the adjuvants evaluated, poly IC was shown the best candidate to follow the recombinant proteins E2CHIKV and EZIKV vaccines, inducing greater magnitude of specific humoral and cellular responses. C57BL/6 mice immunized with the DNA vaccine pVAX-E2CHIKV in the homologous protocol were not able to induce specific humoral response, unlike the homologous recombinant protein (E2CHIKV + poly IC) and the heterologous (pVAXE2CHIKV / E2CHIKV + poly IC) vaccines that induced high specific antibody titers. Analysis of the cellular response showed that 2 doses of the homologous DNA vaccine pVAX-E2CHIKV was able to induce only interferon γ (IFN-γ) producing cells. The homologous E2CHIKV + poly IC vaccine was able to induce greater magnitude response of IFN-γ producing cells and IgG anti- E2CHIKV, as well as the frequency of germinal center (GC) B cells and T follicular helper (TFH). These cellular responses were also observed in mice immunized with the heterologous vaccine (pVAX-E2CHIKV / E2CHIKV + poly IC), but to a lesser extent. BALB/c mice immunized with the homologous DNA pVAX-EZIKV and the recombinant protein EZIKV + poly IC vaccines had the lowest and the highest magnitude of specific humoral response, respectively. Both heterologous vaccines (pVAX-EZIKV / EZIKV + poly IC, and vice-versa) had a medium magnitude of specific humoral response. Although all immunization groups elicited cellular response after the different immunization strategies, the homologous EZIKV + poly IC vaccine was able to induce higher magnitude of IFN-γ producing cells and IgG anti-EZIKV, higher frequency of GC B cells and TFH, proliferation and production of the intracellular cytokines TNF-α and IFN-γ by CD4+ T lymphocytes (LT). Overall, homologous recombinant protein E2CHIKV or EZIKV vaccines in the presence of the poly IC adjuvant were able to induce greater magnitude of humoral and cellular response, however heterologous vaccine strategy may be another option to induce a better quality and range of the immune response against intracellular pathogens.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Resposta imune humoral e autoantígenos na doença cardiovascular
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-12-10) Sant' Anna, Viviane Aparecida Rodrigues [UNIFESP]; Fonseca, Henrique Andrade Rodrigues da [UNIFESP]; Gidlund, Magnus Ake; http://lattes.cnpq.br/1938952491463219; http://lattes.cnpq.br/4644910503257565; http://lattes.cnpq.br/5634287694952808
    Introdução: As doenças cardiovasculares (DCV) são a principal causa de mortalidade, tanto em países em desenvolvimento quanto nos desenvolvidos. A aterosclerose é o principal fator que contribui para a ocorrência das DCV. Vários estudos indicam que há envolvimento das respostas imunes inata e adaptativa contra antígenos derivados da partícula de lipoproteína de baixa densidade oxidada (oxLDL) na aterogênese. A presença de diabetes mellitus tipo 2 (DM2) eleva o risco de um evento cardiovascular, além de estar associada à modulação da resposta imune, que por sua vez, pode ter implicações na progressão da aterosclerose. A definição e a validação de biomarcadores mais específicos na detecção e predição das DCV em todos os seus estágios, bem como na avaliação do risco cardiovascular que contribua para implementação de estratégias terapêuticas são abordagens de pesquisa para prevenção e redução de eventos cardiovasculares em indivíduos com ou sem DM2. Objetivos: Avaliar o papel de autoanticorpos contra fragmentos derivados da oxLDL, de peptídeo derivado da apolipoproteína B-100 (apoB-100, peptídeo ApoB-D) e dos níveis circulantes de oxLDL na predição do risco cardiovascular, bem como os efeitos da intervenção coronária percutânea (ICP) com implante de diferentes tipos de stents na modulação da resposta imune contra esses autoantígenos. Métodos: Esse trabalho foi dividido em três partes. A primeira parte buscou investigar o valor preditivo de autoanticorpos contra autoantígenos derivados da oxLDL e apoB-100 na ocorrência de eventos cardiovasculares adversos maiores (MACE) em indivíduos com DM2. Esse foi um estudo de coorte, multicêntrico com análise prospectiva de desfechos, incluindo 294 participantes com idade entre 30 e 70 anos, de ambos os sexos. Os dados foram coletados entre 2001 e 2011 em diferentes regiões do Brasil. Dados clínicos e laboratoriais foram obtidos no início do estudo para determinar a taxa de risco e intervalo de confiança relacionado a incidência de eventos no período. Amostras de sangue foram coletadas no início do estudo e armazenadas a -80ºC e utilizadas posteriormente para análise de marcadores de resposta imune humoral. A segunda parte da tese incluiu o estudo dos efeitos da ICP com implante de stent de cromo-cobalto convencional e stent com eluidor de sirolimus com polímero biodegradável sobre a modulação de marcadores de resposta imune humoral à autoantígenos e citocinas em indivíduos com doença arterial coronariana. Esse foi um estudo piloto, prospectivo em centro único, que envolveu 30 participantes elegíveis para ICP, randomizados para receber um dos dois tipos de stent (farmacológico – SF e não farmacológico – SNF). Amostras de sangue foram coletadas na artéria periférica (AP) e no seio coronário (SC) no início do estudo e após 40 semanas da intervenção. A terceira parte buscou caracterizar um anticorpo monoclonal desenvolvido pelo nosso grupo, a fim de detectar epítopo derivado da oxidação da LDL por cobre avaliando se esse epítopo tem valor preditivo para MACE em indivíduos com DM2. Anticorpos totais, autoanticorpos, citocinas e níveis do epítopo derivado da oxLDL foram detectados por meio de imunoensaio enzimático. As análises estatísticas em todos os estudos foram feitas utilizando o teste T ou Mann-Whitney para amostras não pareadas, de acordo com a distribuição das variáveis e para análise de variáveis pareadas foram utilizados o teste t pareado ou o teste de Wilcoxon, com correção pelo teste de Bonferroni, p<0,025. As curvas de sobrevida foram realizadas pelo método de Kaplan-Meier e a regressão de Cox para identificar a relação entre os autoanticorpos e os níveis do epítopo derivado da oxLDL e a ocorrência de MACE. Um nível de significância de 5% foi adotado para esses testes. Resultados: Houve uma relação entre os títulos de IgM anti-ApoB-D e MACE apenas em homens. Aqueles com títulos de autoanticorpos IgM mais elevados no início do estudo tiveram um risco menor de eventos cardiovasculares. O mesmo não foi observado para títulos de IgG anti-ApoB-D. Em contraste, as mulheres com níveis mais elevados de IgG anti-ApoB-D no início do estudo apresentaram maior risco de MACE, enquanto não houve relação entre o risco de eventos e os títulos de IgM anti-ApoB-D. Não houve relação entre títulos de IgM ou IgG anti-oxLDL como ocorrência de MACE. No contexto da ICP, após 40 semanas da angioplastia coronariana, houve uma redução nos títulos de IgM anti-oxLDL tanto na AP quanto no SC. Os títulos de IgG anti-ApoB-D foram reduzidos apenas na AP, enquanto os títulos de IgG anti-oxLDL aumentaram na AP. Os níveis de TGF-β e IFN-γ foram reduzidos na AP, mas não no SC. Além disso, foi detectada uma redução nos títulos de IgM anti-oxLDL no grupo SNF na AP e no SC. O monoclonal mAb073SB foi caracterizado e os seus testes padronizados com intervalos entre ensaios (coeficiente intraplacas/intraensaios) < 5%, identificando a especificidade na detecção de epítopo derivado da LDL oxidada por cobre. Ainda, os resultados mostraram valor preditivo desse epítopo para ocorrência de MACE, em homens. Conclusão: Marcadores de resposta imune humoral e níveis de epítopo derivado da oxLDL podem ter valor na predição da ocorrência de MACE sexo-dependente. Além disso, a ICP foi capaz de modular esses marcadores de forma distinta, de acordo com o tipo de stent implantado por longo tempo. Do ponto de vista clínico, esses potenciais biomarcadores serão úteis para a definição do risco individual e para orientação de intervenções para prevenção de eventos cardiovasculares e suas complicações.