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    Avaliação do perfil de agregado plaquetário circulante e da expressão de OX40, CD40L e 4-1BB em pacientes idosos com câncer colorretal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-12-20) Lima, Petrus Moura de Andrade [UNIFESP]; Forones, Nora Manoukian [UNIFESP]; Torres, Leuridan Cavalcante [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4973562538598237; http://lattes.cnpq.br/7314943504526739; http://lattes.cnpq.br/5026314977391614; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A cada ano, mais de 1,2 milhões de pessoas são diagnosticadas com câncer colorretal (CCR) e cerca de 600.000 pessoas morrem por causa dessa doença. A incidência do câncer de cólon aumenta com a idade. O prognóstico dos pacientes com CCR tem melhorado nas últimas décadas, contudo, persiste uma sobrevida global menor nos idosos. O ambiente tumoral é composto por células do sistema imune, que refletem a tentativa desse sistema em promover uma resposta antitumoral. Complexas interações entre células e mediadores imunes no microambiente tecidual regulam o crescimento de tumores, progressão, metástase e angiogênese. O entendimento das alterações da imunidade na população idosa com CCR permitirá o surgimento de novos tratamentos com maiores taxas de resposta. O presente estudo teve por objetivo avaliar o perfil de agregado plaquetário circulante e da expressão de OX40, CD40L e 4-1BB em idosos com câncer colorretal. Foi realizado um estudo de corte transversal e translacional com grupo de comparação interna, envolvendo 41 idosos portadores de CCR e 75 idosos saudáveis. Foi realizada a análise dos valores percentuais de leucócitos, de agregado de plaquetas ativadas aos linfócitos, monócitos e neutrófilos no sangue periférico, e também a análise dos percentuais de expressão de OX40, p-selectina (CD62P) e CD40L em células T, B, neutrófilo e plaquetas por citometria de fluxo. Dosagem no plasma de s4-1BB e sCD40L por enzyme linked immunosorbentassay (ELISA). Testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis foram usados para análise de medianas entre dois e três grupos, respectivamente. As variáveis de distribuição normal foram apresentadas em média e desvio padrão. Foi utilizado o teste t e ANOVA para a comparação das médias entre dois e três grupos, respectivamente. Foram considerados significantes valores de p<0.05. Toda a análise estatística foi realizada através do GraphPadPrism v6.0 Verificou-se níveis percentuais diminuídos de plaquetas/OX40+ nos pacientes com CCR (p<0,0001). Os níveis percentuais de linfócitos B/OX40+ estiveram aumentados nos pacientes metastáticos (p=0,01). Na análise do agregado de plaquetas em leucócitos no sangue periférico, verificou-se que os pacientes apresentaram níveis percentuais reduzidos de AGP-neutrófilos (p=0,004). Os pacientes apresentaram um elevado percentual de plaquetas expressando CD62P quando comparado aos controles (p=0,003). Observou-se nos pacientes valores percentuais reduzidos de expressão de CD40L em plaquetas (p<0,0001) e agregado de plaquetas a leucócitos. Os pacientes apresentaram níveis séricos reduzidos de sCD40L quando comparado aos controles (p=0,002). Os idosos com CCR possuem uma imunossupressão que favorece a progressão da doença. Esse conhecimento reveste-se de importância pela possibilidade do surgimento de novas terapias que possam ativar os mecanismos da resposta imune frente aos antígenos tumorais no CCR.
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    Simultaneous isolation of platelet factor 4 and glycoprotein IIb-IIIa complex from rabbit platelets, and characterization of specific chicken antibodies to assay them
    (Elsevier B.V., 2004-01-01) Santoro, M. L.; Barbaro, K. C.; Rocha, TRF da; Torquato, RJS; Hirata, I. Y.; Sano-Martins, I. S.; Inst Butantan; Pro Sangue Fdn; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Rabbits are frequently used as models for studying coagulation and platelet disorders. However, few reports on literature have dealt with the purification and characterization of rabbit platelet proteins. Herein a protocol for the simultaneous purification of rabbit platelet factor 4 (PF4) and platelet glycoprotein IIb-IIIa (GPIIb-IIIa, integrin alpha(IIb)beta(3)) is described. Specific antibodies were raised in laying chicken, which were used for assaying PF4 by ELISA, and GPIIb-IIIa by direct immunofluorescence and flow cytometry. Furthermore, the binding of monoclonal antibodies specific for GPIIb-IIIa complex (P2), ligand-induced binding site of GPIIIa (LIBS1) and rabbit P-selectin (12A7), as well as of polyclonal IgY specific for rabbit GPIIb-IIIa, was compared in quiescent and thrombin-activated platelets. Polyclonal anti-rabbit PF4 IgY was a specific and sensitive probe that could be used for assaying PF4 in plasma samples. GPIIb-IIIa expression was increased in thrombin-activated platelets, as evaluated by flow cytometric analysis using P2 and polyclonal antibodies raised in chickens. Rabbit GPIIb-IIIa also exhibited a conformational modification that caused the appearance of ligand-induced binding sites. Increased P-selectin expression, used as a positive control, was also noticeable in thrombin-activated platelets. These data evidence that antibodies raised in laying chickens specific to rabbit PF4 and GPIIb-IIIa, as well as certain monoclonal antibodies specific for human GPIIb-IIIa, may be used for investigating rabbit platelet physiology. (C) 2003 Elsevier B.V. All rights reserved.