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    CCR5 expresso em celulas B-1 promove resistencia ao desenvolvimento de melanoma murino
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Vivanco, Bruno Camolese [UNIFESP]
    O melanoma e a neoplasia resultante da malignizacao de melanocitos. Apos perda do controle exercido por queratinocitos, melanocitos transformados deixam a epiderme, estabelecendo comunicacao com componentes estromais da derme e outras celulas. Foi demonstrado por nosso grupo que celulas de melanoma murino da linhagem B16F10, quando em contato fisico com celulas B-1, tem seu potencial metastatico aumentado. Porem o mecanismo pelo qual celulas B-1 migram ate o foco de melanoma e desconhecido. Objetivo: avaliar a influencia do CCR5 expresso em celulas B-1 na evolucao do melanoma induzido por celulas B16F10. Resultados: o presente trabalho demonstrou que celulas B16F10 liberam fatores soluveis, os quais sao quimioatraentes para celulas B-1. Demonstrou-se tambem que 10% das celulas B-1 peritoneais expressam o receptor de quimiocina CCR5 em sua superficie. Estas por sua vez, quando inoculadas em animais CCR5-/- resultam em diminuicao do numero de nodulos metastaticos resultantes da inoculacao de celulas B16F10. Alem disso, este tratamento promove menor taxa de crescimento tumoral subcutaneo, aumentando a sobrevida destes animais. Conclusao: o trabalho contribuiu para o melhor entendimento da quimiotaxia de celulas B-1 e a influencia desta migracao em modelo de melanoma
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    Acesso aberto (Open Access)
    Efeito adjuvante da propionibacterium acnes em vacina de células dendríticas na profilaxia e terapia do melanoma murino
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-04-25) Ishimura, Mayari Eika [UNIFESP]; Maugeri, Ieda Maria Longo [UNIFESP]; Rodrigues, Elaine Guadelupe [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6913514130496062; http://lattes.cnpq.br/0657150642176327; http://lattes.cnpq.br/9202969437650761; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Hybrid vaccines, which are vaccine models of total antigens expressed by a tumor cell combined with the ability of a dendritic cell (DC) to stimulate immune responses, have been investigated in clinical and experimental studies. However, the response triggered by these vaccines is often weak, requiring the use of adjuvants to increase vaccine immunogenicity. Killed Propionibacterium acnes (P. acnes) exerts immunomodulatory effects by increasing the phagocytic and tumoricidal activities of macrophages, promoting DC maturation, inducing pro-inflammatory cytokines production and increasing the humoral response to different antigens. Here, we evaluated the effect of P. acnes on a specific antitumor immune response elicited by a hybrid vaccine in a C57Bl/6 mouse model of melanoma. Two subcutaneous doses of a hybrid vaccine associated with P. acnes increased total IgG-, IgG1- and IgG2c-specific titers to B16F10 antigens, polarizing the humoral response to a T helper 1 (Th1) pattern. Concerning the cellular immune response, the absolute number of memory CD4 and CD8 T cells was increased. Moreover, cells cultured with tumor antigens exhibited increased IFN-γ secretion and reduced IL-4 expression by CD4 T cells, and CD8 T cells secreted larger amounts of IL-17 and IFN-γ. Furthermore, the addition of P. acnes to a hybrid vaccine increased the cytotoxic activity of splenocytes toward B16F10 in vitro and avoided late tumor progression in a pulmonary colonization model. These results revealed the adjuvant effect of a killed P. acnes suspension, as it improved specific humoral and cellular immune responses elicited by DC-tumor cell hybrid vaccines.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Efeito dos processos do cultivo celular de células-tronco endometriais humanas e sua influência na taxa gestacional de murinos submetidos à transferência embrionária
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-12-05) Rochetti, Raquel Cellin [UNIFESP]; Lo Turco, Edson Guimarães [UNIFESP]; Barretto, Letícia Siqueira de Sá [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8335307682492956; http://lattes.cnpq.br/0251394799200508; http://lattes.cnpq.br/5659059615745740; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    As células-tronco vêm sendo fortemente estudadas devido ao seu papel terapêutico. No ambiente uterino, as células-tronco endometriais (EnMSC) são participantes ativas da implantação embrionária atuando como imunomoduladoras dos processos inflamatórios decorrentes desse evento, porém o bom funcionamento e a quantidade dessas células podem influenciar no sucesso de adesão do embrião ao útero. Em terapias celulares, é comum a manipulação in vitro das células-tronco a fim de expandir e/ou armazenar as células para futuras aplicações, porém, processos in vitro podem interferir na qualidade das células influenciando o resultado final do tratamento. Desse modo, o objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos dos processos do cultivo celular das EnMSC e observar a influência do transplante dessas células na taxa gestacional de murinos submetidos à transferência embrionária. Para isso, foram coletados tecidos endometriais de 5 voluntárias, isolados e cultivados in vitro para expansão das EnMSC até a terceira passagem. As EnMSC foram caracterizadas e avaliadas quanto ao crescimento celular e à peroxidação lipídica. Além disso, foi avaliado o perfil metabolômico presente no meio de cultivo condicionado. Em seguida, embriões murinos em fase de blastocisto foram transferidos para camundongas, com e sem o acréscimo de 1x105 células em cada lado do útero. Após o período gestacional foi avaliado a taxa de prenhez, a quantidade de camundongos nascidos e peso ao nascer. Como resultado, pudemos observar que em passagens baixas as EnMSC mantêm um padrão de crescimento in vitro similar entre as passagens, sem alteração no estresse oxidativo. Através da análise metabolômica foi observado um perfil metabólico diferenciado entre as passagens pré e pós-congelamento, de forma que a passagem pós-congelada teve maior abundancia de esfingosina e esfingosina-1-fosfato. Já na transferência embrionária, foi observado estresse das camundongas receptoras acompanhado de ato canibal, além disso, não foi observada diferença significante quanto à taxa de prenhez, número de nascidos e peso ao nascer. Assim, de acordo com os resultados foi possível concluir que o padrão de cultivo utilizado nesse estudo é viável para expansão in vitro das EnMSC e que o congelamento dessas células altera seu perfil metabólico, embora esses fatores não tenham influenciado na taxa de implantação de embriões transplantados às camundongas.
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    O papel da proteina integral da membrana lisossomal, LIMP-2, na internalizacao de particulas e patogenos intracelulares por fibroblastos embrionarios murinos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Goncalves, Viviane Martinelli [UNIFESP]
    Lisossomos sao organelas envolvidas em muitos processos celulares, como em processos endociticos, autofagia, reparo de membrana, entre outros. Diversas proteinas sao encontradas na membrana lisossomal, dentre elas podemos citar as LAMPs (proteinas associadas a membrana lisossomal) e LIMPs (proteinas integrais da membrana lisossomal). Vacuolos intracelulares nos quais patogenos como a bacteria Coxiella burnetii e o protozoario Trypanosoma cruzi se estabelecem em celulas hospedeiras, apos o periodo inicial de invasao, possuem caracteristicas de lisossomos/ endossomos tardios e contem em sua membrana algumas glicoproteinas lisossomais, como LAMPs e LIMPs. A proteina LIMP-2 esta envolvida com o transporte e direcionamento da enzima β-Glucocerebrosidase (βGC) para o lisossomo. O objetivo desse trabalho foi estudar o papel das glicoproteinas lisossomais LIMPs em processos de pinocitose, endocitose de particulas inertes, colonizacao por patogenos e avaliar a atividade da enzima βGC em fibroblastos embrionarios de camundongos (MEF) nocautes para essas proteinas. Foi verificado que MEFs que nao expressam LIMP-2 nao apresentam caracteristicas de fagocitos profissionais, mas sao mais permissivas a invasao por amastigotas extracelulares da cepa G de Trypanosoma cruzi quando comparados aos MEFs wild type. A ausencia de LIMP-2 inibe a atividade da enzima lisossomal β-Glucocerebrosidase e o tratamento das MEFs LIMP-2 KO com a forma recombinante humana desta enzima converte o aumento da invasao por T. cruzi. O trabalho mostra que a ausencia da proteina LIMP-2 torna as celulas mais suscetiveis a invasao por formas amastigotas extracelulares da cepa G de T. cruzi, processo que pode ser parcialmente revertido com a reposicao da enzima recombinante βGC.