Navegando por Palavras-chave "Motilidade espermática"
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- ItemAcesso aberto (Open Access)Avaliação seminal de ciclistas de baixo e alto rendimento(Universidade Federal de São Paulo, 2022-05-20) Adami, Luana Nayara Gallego [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; http://lattes.cnpq.br/8127972790085890Objetivo: Estudar o efeito da prática intensa do ciclismo no potencial fértil masculino. Método: O estudo transversal incluiu 72 amostras seminais provenientes do grupo Alto Rendimento (AR=32), do grupo Baixo Rendimento (BR=28) e do grupo Controle (C=12). Inicialmente os voluntários foram avaliados por um urologista e encaminhados para a coleta seminal. Uma alíquota do sêmen foi utilizada para avaliação do espermograma, outra foi centrifugada a 600xG por 30 minutos quando o plasma seminal foi separado e utilizado na análise proteômica por meio de quantificação e digestão proteica, análise por espectrometria de massas e busca das proteínas correspondentes aos espectros encontrados. Quanto ao pellet restante, foi ressuspendido e analisado de acordo com a função dos espermatozoides, como análise cinética por meio da motilidade espermática, integridade acrossômica, atividade mitocondrial, aferição do potencial de membrana mitocondrial, fragmentação de DNA e quantificação de ânions superóxidos nos espermatozoides. A análise estatística foi realizada no programa SPSS, iniciando com análise descritiva dos dados e aplicando um teste por Modelos Lineares Generalizados, adotando um α de 5%. Para análise proteômica foi realizado o teste Kruskal-Wallis com post hoc de Games Howell e a Análise Discriminante. Resultados: O grupo BR apresentou maiores valores de neutrófilos, cinética espermática (velocidade média de percurso e velocidade retilínea) e integridade de DNA espermático, quando comparado ao grupo AR. Por outro lado, o grupo AR apresentou maiores taxas de presença do ânion superóxido e fragmentação do DNA classe III, quando comparado ao grupo BR, assim como alta taxa de fragmentação classe IV quando comparado ao grupo C. Foram encontradas 14 proteínas diferencialmente expressas do total de 281 quantificadas, sendo 2 hiperexpressas no grupo AR e 4 no grupo BR. As demais proteínas estiveram hipoexpressas em relação ao grupo C. Conclusões: O ciclismo de Alto Rendimento está associado a um aumento dos níveis de fragmentação do DNA espermático e elevação da atividade oxidativa intracelular, enquanto o de Baixo Rendimento à alta expressão proteica de resposta ao processo imune e inflamatório, à via alterativa de energia e à proliferação celular.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Compostos com papel espermicida desenhados a partir do polipeptídeo ATx isolado do veneno da aranha Latrodectus mactans do Chile(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Ambrosio, Lilian Faccioli de Sousa [UNIFESP]; Miranda, Antonio de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2401002724814481O ATx e um polipeptideo isolado a partir do veneno da aranha Latrodectus mactans do Chile, constituido de 69 residuos de aminoacidos (PM = 7843,7009 Da), e entre eles seis residuos de cisteina que formam tres pontes de dissulfeto, a partir dessa estrutura desenhamos 4 novos analogos com as seguintes estruturas:Ala43]-ATx41-60-NH2, Ac-SLAKTNCFTTEYFQHCVKDL-NH2; Ac-[Ala43, Ser47,56]-ATx41-60-NH2, Ac-SLAKTNSFTTEYFQHSVKDL-NH2; Ac-ATx46-60-NH2, Ac-NCFTTEYFQHCVKDL-NH2; Ac-ATx46-57-NH2, Ac-NCFTTEYFQHCV-NH2. Esses peptideos foram obtidos pelo metodo de sintese de fase solida pela estrategia FMOC, em seguida os analogos foram clivados, purificados (CLAE) e caracterizados por CL/EM-IES e AAA. A analise de estrutura secundaria foi feita pela tecnica de dicroismo circular (CD), onde foram testadas a influencia do pH, SDS (1 e 15 mM), e TFE (10, 30, 50 e 70%) e de H2O na conformacao dos fragmentos. A estabilidade dos derivados do ATx foram estudadas nos seguintes fluidos biologicos: semen humano e de rato, secrecao vaginal de coelha, e plasma humano. Foram avaliadas tambem a motilidade e viabilidade dos espermatozoides (humano e rato) em contato com os peptideos. Observamos um comportamento conformacional semelhante de todos os fragmentos quando analisados por CD quanto a variacao do pH, onde todos apresentaram um tendencia de estrutura randomica. Ja em SDS todos os fragmentos apresentaram uma tendencia de conformacao em alfa-helice, assim como na presenca de TFE. Finalmente, em agua todos os peptideos tambem apresentaram uma estrutura randomica. Nos estudos de semen e plasma humano a estabilidade de todos os fragmentos foram preservadas num periodo de incubacao de ate 120 minutos. Na estabilidade de fluido vaginal de coelha o unico analogo mais degradado foi o Ac-[Ala43, Ser47,56]-ATx41-60-NH2, mas somente apos um periodo deproximadamente 24 horas de incubacao. Os estudos de motilidade e viabilidade apontaram que o fragmento linear, Ac-[Ala43, Ser47,56]-ATx41-60-NH2, apresentou os melhores resultados, ja que foi capaz de diminuir um pouco a viabilidade, mas principalmente reduzir significativamente as motilidades dos espermatozoides. Um possivel mecanismo para esta acao espermicida e que pelo aumento do calcio intracelular e pela reducao do pH intracelular dos espermatozoides, haja como consequencia desta acidificacao, uma inativacao dos canais de calcio do flagelo e/ou uma liberacao dos estoques de calcio intracelulares, que por sua vez ajudariam os espermatozoides a ficarem no estado imovel
- ItemAcesso aberto (Open Access)Efeito da varicocele na capacitação espermática.(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-01-30) Andretta, Rhayza Roberta [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; http://lattes.cnpq.br/9849436514855388; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Introdução: A varicocele é definida como uma dilatação anormal das veias espermáticas internas do plexo pampiniforme com fluxo sanguíneo retrógrado nas veias testiculares internas. É uma das principais doenças associadas à infertilidade masculina e é responsável por alterações na qualidade do sêmen, levando a falhas nos processos associados à fertilização, como por exemplo, a capacitação espermática. Na capacitação espermática, diversas mudanças fisiológicas ocorrem no espermatozoide, como: ativação da proteína quinase A, estímulo na produção de espécies reativas de oxigênio, aumento dos níveis de fosforilação, mudanças no padrão da motilidade e reação acrossômica. Entretanto, estudos associados a varicocele e capacitação espermática são escassos na literatura. Objetivos: Avaliar os efeitos da varicocele na capacitação espermática de homens adultos, em espermatozoides viáveis. Métodos: Amostras seminais dos homens do grupo controle (n=19) e varicocele (n=37) foram coletadas. Uma alíquota do plasma seminal foi separada a fim de verificar os níveis de expressão das proteínas fosforiladas pela PKA. O volume excedente foi submetido ao gradiente de densidade descontínuo. Posteriormente, o pellet obtido foi lavado, com meio de cultura HTF enriquecido com soro bovino de albumina (1%) (p:v). Uma alíquota foi submetida à análise da motilidade computadorizada (CASA). O excedente foi induzido à capacitação, por período de 2 horas, com meio de cultura HTF, com BSA (1%) (p:v), 37 ºC, 5% CO2. Após esse procedimento, foram avaliados: motilidade computadorizada (CASA), capacitação espermática, estado acrossomal (não íntegro/reagido) (com e sem progesterona), integridade da membrana plasmática, atividade intracelular dos ânions superóxidos e atividade mitocondrial. Os grupos foram comparados utilizando o teste T de Student para amostras independentes. A motilidade espermática computadorizada (CASA) e o estado acrossomal, foram avaliados pelo teste General Linear Models (GLM) para medidas repetidas. Os resultados foram considerados estatisticamente significantes, quando p < 0,05. Resultados: Homens com varicocele apresentaram menor atividade mitocondrial e menor capacitação espermática. A integridade da membrana plasmática, o estado acrossomal, a atividade intracelular dos ânions superóxidos e as proteínas fosforiladas pela PKA não foram alteradas nos pacientes com varicocele. A capacitação espermática teve efeito sobre a motilidade, na velocidade média do trajeto e na retilinearidade, mas não houve efeito da varicocele sobre essa alteração. Conclusão: A varicocele está associada a menor atividade mitocondrial e menor capacitação dos espermatozoides, mesmo após a seleção espermática pelo método de gradiente de densidade descontínuo. A capacitação aumentou a velocidade média do trajeto e diminuiu a retilinearidade dos espermatozoides. Não houve interação dos efeitos da capacitação nos homens com varicocele.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Influência da fosforilação oxidativa e via glicolítica na motilidade e aspectos funcionais de espermatozoides humanos(Universidade Federal de São Paulo, 2022) Miralha, Júlia Cunha [UNIFESP]; Lopes, Paula Intasqui [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; http://lattes.cnpq.br/5188240479960852; http://lattes.cnpq.br/5064560388516706Apesar da fosforilação oxidativa ser mais eficiente para gerar energia do que a glicólise, a função das mitocôndrias no metabolismo dos espermatozoides ainda não está clara. Estudos indicam que a via glicolítica é tão importante quanto a fosforilação oxidativa para manter o metabolismo espermático; no entanto, informações a respeito da relação entre essas duas vias na motilidade e funcionalidade de espermatozoides humanos ainda é escassa. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar a influência da fosforilação oxidativa e da via glicolítica na motilidade e integridade funcional dos espermatozoides humanos em resposta ao desacoplamento mitocondrial e à inibição glicolítica. Na proposta inicial do projeto, seriam realizados experimentos para determinar a curva dose- resposta para o desacoplador mitocondrial (experimento 1) e para o inibidor glicolítico (experimento 2), para selecionar as concentrações que promoveram o máximo de despolarização mitocondrial e inibição da via glicolítica sem causar disfunções celulares significativas. Para o primeiro experimento, seis amostras foram avaliadas quanto a atividade mitocondrial e motilidade espermáticas, após a incubação com diferentes concentrações do desacoplador mitocondrial carbonil cianida p−trifluorometoxifenilhidrazona (FCCP). Já para o segundo experimento, quatro amostras foram incubadas com diferentes concentrações do inibidor glicolítico 2-deoxi–D–glicose (DOG) e avaliadas quanto a vitalidade e motilidade espermáticas. A atividade mitocondrial e motilidade espermáticas foram avaliadas através da coloração mitocondrial com 3,3’-diaminobenzidina (DAB) e microscopia de campo claro com contraste de fase, respectivamente, enquanto a vitalidade espermática foi analisada através de coloração com eosina-nigrosina. As curvas dose-resposta obtidas nos experimentos 1 e 2 foram analisadas por meio do software Prism 8.4.3 e submetidas à avaliação de regressão linear, para cálculo do IC50 de cada variável a partir da equação da reta. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que, ao contrário do esperado, as doses e protocolos utilizados para a incubação com o desacoplador mitocondrial FCCP e o inibidor glicolítico DOG não causaram alteração significativa na atividade mitocondrial e motilidade espermáticas.