Navegando por Palavras-chave "Lipossomos"
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- ItemAcesso aberto (Open Access)Efeito da funcionalização de lipossomas com polímero na eficiência de encapsulamento de clodronato e na estabilidade da vesícula(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-03-29) Ventura, Poliana de Oliveira [UNIFESP]; Daghastanli, Katia Regina Perez [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2250091739407083; http://lattes.cnpq.br/6073744163782240; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Encapsulating a medicament can direct it to the targeted tissue, which enables the administration of smaller doses of a certain drug. The liposomes are safe and efficient carriers for the delivery of drugs. Although, due to their high biocompatibility, they are rapidly captured decreasing it’s delivery potential in the targeted tissue. An alternative aiming the avoidance of this effect is the functionalization of the liposomes with molecules that make the accession of immune system components and/or the nonspecific interaction with other tissues more difficult. Utilizing polymers in the surface of these carriers has resulted in an increase in their circulation time. Therefore, the manipulation of the physical-chemistry characteristics, like the kind of polymer, the size, the composition, the pH or temperature variances, of this system is important in the understanding and in the design of new drug-delivery carriers. The aim of the work was to study de physical-chemistry aspects involved in the functionalization of liposomes composed of stearoyl oleoyl phosphatidylcholine (SOPC) and polyethylene glycol 400 monolaurate (PEG400ML), which were obtained by extrusion. The vesicles stability was observed for three consecutive days through different techniques, such as dynamic light scattering measurements (DLS), monitoring their size, and zeta potential measurements, SOPC LUVs carboxyfluorescein leakage assays with different PEG400ML concentrations and comparing SOPC LUVs with cholesterol, already known and described in literature. The results obtained indicate that particles propensity increase and aggregate over the course of days. Although, the kinetic of leakage of carboxyfluorescein show that the vesicles of SOPC with 2,5 mol% of PEG400ML exhibit relatively stable during the tree days of experimente. Corroborate that the studys the measures of DSC showed that the best formulation to work and more stable for application as vehicle of drug delivery carrier has the formulation of SOPC with 2,5 mol% of PEG400ML.
- ItemSomente MetadadadosEstudo da atividade de fragmentos da crotamina frente a modelos mimeticos de membrana(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Pinheiro, Daniel de Ascencao [UNIFESP]Peptideos antimicrobianos (PAMs) sao parte fundamental de um sistema especializado de defesa presente em todos os organismos. A maioria dos PAMs tem acao contra varios tipos micro-organismos, demonstrada in vitro. Diferencas entre as celulas de mamiferos (eucariotos) e micro-organismos (procariotos), incluindo as diferencas na constituicao lipidica da membrana, poderiam potencialmente explicar a acao seletiva dos PAMs em micro-organismos. Entre os diversos mecanismos de acao propostos para os PAMs, a principal se refere a permeabilizacao de membrana, que podem ainda ser subdivididos entre: os formadores de poros e os nao formadores de poros. A crotamina e um PAM, isolada pela primeira vez na decada em 1950 a partir do veneno da cascavel. Este peptideo e composto por 42 residuos de aminoacidos, sua estrutura secundaria possui uma α-helice e duas folhas-β, alem de tres ligacoes de dissulfeto, que conferem uma estrutura terciaria estavel e uma caracteristica anfipatica para esta molecula. Esta caracteristica levou ao estudo e descricao de diversas atividades biologicas da crotamina, que incluem a capacidade de provocar espasmos em musculos esqueleticos, seu efeito em canais ionicos, alem da capacidade de penetrar celulas. Alem disto, a atividade antimicrobiana da crotamina tambem foi demonstrada, possibilitando verificar que a crotamina possui um espectro antibacteriano estreito e com atividade mais marcante contra fungos. Nesse trabalho propomos verificar as possiveis interacoes de derivados peptidicos da crotamina com sistemas mimeticos de membrana de procariotos (negativa) com vesiculas unilamelares grandes (LUVs). Dois peptideos (C1 e C2), contendo metade das cargas positivas da crotamina em cada um, foram sintetizados e testados em experimentos de vazamento de LUVs contendo grupamento fluorescente encapsulado, em testes de determinacao do tamanho hidrodinamicos de LUVs, e de determinacao potencial zeta e fluorescencia intrinseca do triptofano na presenca destas LUVs. A interacao dos peptideos com as membranas negativas foi observada, assim como o observado para a crotamina, porem o vazamento de CF causado pelos peptideos C1 e C2 nao foi significativo, comparado ao ja descrito para a crotamina. A partir dos experimentos realizados, podemos sugerir que C2 apresenta maior interacao com as membranas do que o peptideo C1, promovendo ainda a agregacao de LUVs
- ItemSomente MetadadadosEstudo da resposta citotoxica para antigeno soluvel encapsulado em liposomos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Lopes, Luciene Mattos [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosO papel da proteina integral da membrana lisossomal, LIMP-2, na internalizacao de particulas e patogenos intracelulares por fibroblastos embrionarios murinos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Goncalves, Viviane Martinelli [UNIFESP]Lisossomos sao organelas envolvidas em muitos processos celulares, como em processos endociticos, autofagia, reparo de membrana, entre outros. Diversas proteinas sao encontradas na membrana lisossomal, dentre elas podemos citar as LAMPs (proteinas associadas a membrana lisossomal) e LIMPs (proteinas integrais da membrana lisossomal). Vacuolos intracelulares nos quais patogenos como a bacteria Coxiella burnetii e o protozoario Trypanosoma cruzi se estabelecem em celulas hospedeiras, apos o periodo inicial de invasao, possuem caracteristicas de lisossomos/ endossomos tardios e contem em sua membrana algumas glicoproteinas lisossomais, como LAMPs e LIMPs. A proteina LIMP-2 esta envolvida com o transporte e direcionamento da enzima β-Glucocerebrosidase (βGC) para o lisossomo. O objetivo desse trabalho foi estudar o papel das glicoproteinas lisossomais LIMPs em processos de pinocitose, endocitose de particulas inertes, colonizacao por patogenos e avaliar a atividade da enzima βGC em fibroblastos embrionarios de camundongos (MEF) nocautes para essas proteinas. Foi verificado que MEFs que nao expressam LIMP-2 nao apresentam caracteristicas de fagocitos profissionais, mas sao mais permissivas a invasao por amastigotas extracelulares da cepa G de Trypanosoma cruzi quando comparados aos MEFs wild type. A ausencia de LIMP-2 inibe a atividade da enzima lisossomal β-Glucocerebrosidase e o tratamento das MEFs LIMP-2 KO com a forma recombinante humana desta enzima converte o aumento da invasao por T. cruzi. O trabalho mostra que a ausencia da proteina LIMP-2 torna as celulas mais suscetiveis a invasao por formas amastigotas extracelulares da cepa G de T. cruzi, processo que pode ser parcialmente revertido com a reposicao da enzima recombinante βGC.
- ItemSomente MetadadadosRelacao estrutura-atividade de analogos da gomesina(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Mattei, Bruno [UNIFESP]Peptideos antimicrobianos sao moleculas de defesa amplamente distribuidas nos reinos animal e vegetal. A maioria destes peptideos atua permeabilizando a membrana de micro-organismos, induzindo-os a morte. Apesar de ser uma classe estruturalmente muito diversa, algumas caracteristicas sao comuns aos peptideos antimicrobianos permeabilizadores de membrana: baixo peso molecular e carater anfipatico e cationico. A gomesina (Gm) e um peptideo antimicrobiano originalmente isolado da aranha caranguejeira Acanthoscurria gomesiana. A Gm possui 18 residuos de aminoacidos (ZCRRLCYKQRCVTYCAGR-NH2), sendo 6 cationicos e 4 cisteinas formando duas pontes dissulfeto, o que confere a Gm estrutura do tipo -hairpin mesmo em solucao aquosa. Este trabalho teve como objetivo estudar a influencia de diferentes residuos de aminoacido da Gm na sua capacidade de interagir com membranas, usando lipossomas como membrana modelo. Para tanto, foram sintetizados peptideos com substituicao pontual de alguns residuos de aminoacidos por alanina (nas posicoes 1, 3, 5, 7, 9, 10, 12, 14), alterando tanto a carga total do peptideo quanto sua hidrofilicidade total. Como modelos de membrana bacteriana foram utilizadas vesiculas unilamelares compostas de misturas de um fosfolipidio anionico, POPG, e um zwiterionico, POPC, na razao molar 3:7 POPG:POPC. A interacao da Gm e seus analogos com membranas modelo foi estudada por diferentes tecnicas: calorimetria de titulacao isotermica (ITC), espalhamento de luz estatico, cinetica de vazamento de carboxifluoresceina (CF) e microscopia optica. Por meio dos resultados calorimetricos, acessou-se os parametros termodinamicos da interacao peptideo-lipidio, como as variacoes de entalpia, H, entropia, S e energia livre de Gibbs, G, e a constante de ligacao, K. As tecnicas de espalhamento de luz estatico e microscopia optica foram utilizadas para se avaliar a extensao de agregacao de vesiculas induzida pelos peptideos. A porcentagem de vazamento de CF foi usada para quantificar a mudanca na permeabilidade da membrana induzida pelos peptideos, bem como para obtencao de informacoes sobre a cinetica de vazamento de CF. A microscopia optica de vesiculas gigantes permitiu a visualizacao do mecanismo de permeabilizacao de membranas dos diferentes analogos da gomesina. Os resultados mostram que, de uma maneira geral, a magnitude dos efeitos causados pelos diferentes peptideos relaciona-se a uma escala de hidrofilicidade, definida a partir da soma das hidrofilicidades calculadas para cada aminoacido dos diferentes peptideos. Entretanto, excecoes foram observadas, mostrando que a posicao dos residuos de aminoacidos tambem e relevante para a atividade da gomesina. Desta tendencia geral, pode-se concluir que: i) a diminuicao na hidrofilicidade do peptideo aumenta H, G e a constante de ligacao K; ii) a extensao de agregacao lipidica induzida pelos peptideos esta relacionada principalmente a carga do peptideo, aumentando com o aumento da carga; iii) o vazamento total de CF induzido aumenta com a diminuicao da hidrofilicidade; iv) as cineticas de vazamento de CF apresentam dois tempos caracteristicos muito distintos (um rapido da ordem de poucos segundos, e outro lento, da ordem de varios minutos), sendo que o primeiro processo, responsavel pela maior contribuicao ao vazamento total, torna-se mais lento e menos relevante com o aumento da hidrofilicidade do peptideo; v) todos os peptideos induzem explosao de vesiculas gigantes, mostrando que nao ha diferencas qualitativas na interacao entre os analogos da gomesina e os modelos de membranas
- ItemAcesso aberto (Open Access)REVs-Chi: um novo sistema particulado para encapsulação de macromoléculas terapêuticas(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-07-29) Rescia, Vanessa Cristina [UNIFESP]; Costa, Maria Helena Bueno da [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)A quitosana (Chi), a (1-4)-amino-2-desoxi-ƒÒ-glicana, e a forma desacetilada da quitina, um polissacarideo das conchas de crustaceos. As suas caracteristicas unicas como a carga positiva, biodegradabilidade, biocompatibilidade, atoxicidade e estrutura rigida fazem com que esta macromolecula seja ideal para uso como sistema oral de entrega de vacinas. Foram preparadas vesiculas unilamelares grandes (REVs) envoltas por dentro e por fora (como um sanduiche) com quitosana (Chi) e poli-vinil alcool (PVA). Entretanto, existem alguns problemas as serem superados com relacao a estabilizacao da proteina durante este processo. Durante a fase de formacao de micelas reversas, no processo de nanoencapsulacao da proteina, expandem-se as interfaces hidrofobicas que entao levam as adsorcoes interfaciais seguidas por desenovelamento e agregacao das proteinas. Aqui, observaram-se atraves de tecnicas espectroscopicas e imunologicas, o uso dos sais da serie de Hoffmeister durante a fase de formacao de micela reversa para estudar a conformacao estavel do toxoide difterico (Dtxd). Foi estabelecida uma correlacao entre os sais usados na fase aquosa e as variacoes na solubilidade e conformacao de Dtxd. Como o conteudo em helice-ƒÑ foi praticamente estavel concluiu-se que a encapsulacao de Dtxd ocorreu sem agregacao ou sem exposicao de residuo hidrofobico na proteina. A agregacao de Dtxd foi evitada em 98 % quando se usou o cosmotropico PO2-4. Este ion foi usado para se preparar uma formulacao de Dtxd em REVs-Chi-PVA estavel e com identidade imunologica reconhecida na presenca de PO2-4. Entao, obteve-se uma solubilidade e estabilidade maxima de Dtxd depois de seu contacto com CH3CO2C2H5 para comecar a sua nanoencapsulacao em condicoes ideais. Este foi um avanco tecnologico importante porque uma solucao simples, como e a adicao de sais, evitou o uso de proteinas heterologas (Rescia et alii, 2009a). A proteina estabilizada foi entao encapsulada dentro de REVs como o descrito. Os lipossomas tem sido descritos como adjuvantes desde 1974 (Allison e Gregoriadis, 1974). A maior limitacao de seu uso em vacinas orais e a sua instabilidade estrutural causada pelas atividades enzimaticas do meio. O objetivo aqui foi combinar lipossomas, que podem encapsular antigenos (Dtxd, Diphtheria toxoid) com quitosana que protege estas particulas e promove a mucoadesibilidade. Empregaram-se tecnicas fisicas para se entender o processo pelo qual lipossomas (SPC: Cho, 3: 1) podem ser recobertos (interna e externamente) com quitosana (Chi) e PVA (poly-vinilic-alcohol) que sao polimeros biodegradaveis e biocompativeis. Obtiveram-se particulas de REVs-Chi (vesiculas preparadas por evaporacao de fase reversa recobertas interna e externamente com Chi) redondas e com as superficies rugosas e estabilizadas ou nao com PVA. As eficiencias de encapsulacao (Dtxd foi usada como antigeno) foram diretamente dependentes da presenca de Chi e PVA na formulacao. A adsorcao de Chi a superficie de REVs foi acompanhada por um aumento no potencial ƒê. Em contraste, a adsorcao de PVA a surperficie de REVs-Chi foi acompanhada por uma diminuicao do potencial . A presenca de Dtxd aumentou a eficiencia de adsorcao de Chi as superficies. A afinidade de PVA pela mucina foi 2000 vezes maior do que a observada somente com Chi e nao depende se a molecula esta em solucao ou se esta adsorvida a superficie lipossomal. A liberação do Dtxd foi retardada por sua encapsulação dentro de REVs-Chi-PVA. Concluiu-se que estas novas vesículas estabilizadas foram hábeis em se adsorverem às superfícies intestinais, resistiram às degradações e controlaram a liberação do antígeno. Assim, as partículas de REVs-Chi-PVA podem ser usadas como um veículo oral com capacidade adjuvante (Rescia et alii, 2009b). Os lipossomas revstidos por quitosana (REVs-Chi) como veículos orais para transporte de vacinas foram bem caraterizados neste laboratório. Estas partículas foram desenhadas para serem capturadas pelo muco, para interagirem com surperfícies orais e para resistirem às enzimas do trânsito gástrico. Foram usadas três formulações diferentes contendo o Dtxd (toxoide diftérico) para imunizar camundongos: REVs [Vesículas unilamelares obtidas por evaporação de fase reversa produzidas com SPC: Cho (3:1)]; REVs-Chi (REVs recobertas por Chi) e REVs-Chi-PVA (REVs recobertas por Chi e estabilizadas por PVA). Através do teste de adesibilidade e dos experimentos com anti-toxoide diftérico observou-se que houve uma correlação direta entre a complexidade da partícula (antígeno livre < REVs < REVs-Chi < REVs-Chi-PVA) e a produção de anticorpos (IgA, IgG1 and IgG2a) em todos os ensaios (R= 0,91766- 0,99718). O resultado mais interessante foi a total ausência da produção de IgA nos camundongos imunizados com o antígeno livre, provando então a excelência das partículas engenheiradas. Além do aumento da produção dos anticorpos de mucosa, ambas formulações com Chi ou com Chi-PVA estimularam tanto a produção de anticorpos humorais quanto a seletividade. Demonstrou-se que é possível de se estabelecer uma correlação entre REVs-Chi/Dtxd and REVs-Chi-PVA/Dtxd e o aumento da imunidade de mucosa. Estas partículas podem ser usadas como veículo geral tanto para transporte de drogas quanto de vacinas (Rescia et alli, 2009c).
- ItemSomente MetadadadosTratamento da forma mucosa de Leishmaniose com novo esquema terapeutico com antimonial pentavalente e duas drogas: aminosidina e anfotericina B com lipossoma(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1993) Sampaio, Raimundo Nonata Ribeiro [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosTratamento da Leishmaniose visceral com anfotericina B lipossomal em São Luís do Maranhão - Brasil(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1996) Viana, Graça Maria de Castro [UNIFESP]; Burattini, Marcelo Nascimento [UNIFESP]