Navegando por Palavras-chave "LINE-1"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Análise da expressão e do número de cópias de LINE-1 em neurônios obtidos in vitro de indivíduos dentro do transtorno do espectro autista
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022) Sousa, Kathleen da Silva [UNIFESP]; Mello, Cláudia Berlim de [UNIFESP]; Teixeira, Taiza Stumpp [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1024329256080770; http://lattes.cnpq.br/1758368777559433; http://lattes.cnpq.br/5128529345894889
    O Transtorno do Espectro Autista (TEA) é um transtorno do neurodesenvolvimento e faz parte de um conjunto de doenças complexas cujas causas e mecanismos de herança ainda não foram plenamente desvendados. Apesar estudos de gêmeos sugerirem um forte componente genético, apenas 10% dos casos de TEA derivam dessas desordens genéticas. Estas evidências indicam a participação crítica de fatores de risco ambientais na etiologia do transtorno e a importância de pesquisar fatores biológicos como os mecanismos genéticos e epigenéticos, além dos fatores ambientais. Estudos recentes demonstram que alterações epigenéticas em genes de elementos transponíveis desempenham um papel importante em seu desenvolvimento. Entre os elementos transponíveis, o retrotransposon LINE-1 tem demonstrado desempenhar um importante papel na fisiopatologia do TEA. Assim, o atual projeto objetiva investigar o perfil de expressão e variação do número de cópias das sequências LINE-1 em pacientes com TEA. Inicialmente, foram geradas células-tronco pluripotente induzidas (iPSC) a partir de linfócitos, tanto para o grupo controle, quanto para o grupo dos indivíduos afetados. Após a diferenciação celular em neurônios, essas células passaram por uma extração de DNA e RNA total através da utilização do kit AllPrep DNA/RNA (Qiagen) segundo instruções do fabricante. A seguir, as amostras de RNA total passaram por uma reação da transcriptase reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR) utilizando primers previamente desenhados para a análise da expressão do LINE-1 através. Os dados obtidos foram analisados pelo teste estatístico Wilcoxon e demonstraram que o LINE-1 possui uma maior expressão gênica relativa no grupo TEA quando comparado ao grupo controle (p<0.05). Esse resultado é corroborado por dados presentes na literatura que demonstram uma maior expressão desse retrotransposon nas células somáticas de indivíduos autistas. Todavia, é importante ressaltar que embora a maior parte dos estudos sobre LINE-1 em transtornos psiquiátricos utilizem da técnica de qPCR estabelecida por Coufal et al. (2009) para a análise do número de cópias e expressão do gene, ainda não há certeza que esse protocolo avalie apenas sequencias ativas. Deste modo, é lícito afirmar que resultados como esses evidenciam a relevância de continuar investigando o comportamento desses genes na fisiopatologia do TEA.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Análise da expressão e do número de cópias de LINE-1 em PBMC de indivíduos dentro do transtorno do espectro autista e nos espermatozoides de seus pais
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-10-30) Sousa, Kathleen da Silva [UNIFESP]; Stumpp, Taiza [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1024329256080770; http://lattes.cnpq.br/5128529345894889
    Objetivo: Estudos recentes demonstram que alterações epigenéticas em elementos transponíveis (TE) estão correlacionadas ao risco de autismo. Entre os TE, o retrotransposon LINE-1 tem demonstrado estar com a expressão, a metilação e o número de cópias alterados em diversos tecidos de coortes autistas. Assim, a presente pesquisa objetivou analisar a expressão e o número de cópias do LINE-1 no genoma de indivíduos dentro do autismo com grau I e II, como também no genoma dos seus respectivos pais. Métodos: Foram coletadas células mononucleares de sangue periférico (PBMC) dos participantes autistas, bem como de PBMC e espermatozoides de pais de participantes autistas. Participantes controles também tiveram as mesmas amostras coletadas. Após a extração de DNA e RNA e síntese de cDNA, as amostras foram submetidas à qPCR utilizando primers previamente desenhados para a análise do número de cópias e da expressão de LINE-1. Resultados: Nas PBMCS, a expressão de LINE-1 não apresentou diferenças significativas entre os grupos, apesar de um aumento significativo no número de cópias desse retrotransposon em indivíduos autistas. Aumento da expressão de LINE-1 foi observado nos espermatozoides dos pais de autistas, sugerindo uma possível alteração nos mecanismos de controle da expressão desse retrotransposon. Limitações metodológicas e tamanho amostral foram reconhecidos, indicando a necessidade de estudos futuros para confirmar e expandir esses achados. Conclusões: Esse estudo fornece indicações preliminares de que existe variação do número de cópias do LINE-1 em pessoas autistas e a alterações da expressão desse retrotransposon nos espermatozoides dos pais de indivíduos autistas. Os resultados obridos levantam questões importantes sobre o envolvimento da desregulação de LINE-1 nos autismos. Embora esse estudo tenha se concentrado na expressão e na variação do número de cópias do LINE-1, pesquisas futuras de nosso grupo estão se dedicando a investigar fatores adicionais, como a regulação epigenética do LINE-1.