Navegando por Palavras-chave "In vitro techniques"

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    Adaptação de Candida albicans a condições físicas que mimetizam o hospedeiro - hipóxia e choque térmico na presença e ausência de bactérias comensais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-11-30) Silva, Danielle do Carmo Ferreira da [UNIFESP]; Briones, Marcelo Ribeiro da Silva [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0018992452321910 ; http://lattes.cnpq.br/1493638403776333; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Infecções por micro-organismos são frequentemente causadas por mais de uma espécie. Essas infecções polimicrobianas são comuns em ambiente hospitalar e em geral associadas a superfícies abióticas tais como cateteres. As leveduras e bactérias formam biofilmes nessas superfícies onde a tensão de oxigênio está no nível atmosférico e a temperatura em torno de 23C. Ao passar do cateter para o paciente, estes micro-organismos passam para tensão de oxigênio menor (hipóxia) e a temperatura corporal (37°C) induz resposta ao choque térmico. Os efeitos dessas alterações foram pouco estudados, uma vez que as culturas rotineiras de Candida albicans usam aeração e temperaturas de 30°C, além de serem analisadas isoladamente, sem levar em consideração as infecções polimicrobianas. Com o intuito de representarmos as condições do hospedeiro que afetam C. albicans por tempo prolongado, nós simulamos um modelo de evolução in vitro por até 48 semanas, em que duas linhagens de C. albicans, SC5314 e L757, foram cultivadas sob diferentes condições de oxigenação e temperatura na presença e ausência de bactérias. Nossos resultados mostraram que diferentes linhagens de C. albicans podem ser coisoladas com diferentes bactérias gram-positivas que podem ser constituintes da microbiota e/ou presentes em infecções, e que essas bactérias não são frequentemente identificadas devido ao meio de cultivo rotineiro de C. albicans nos laboratórios. Além disso, confirmamos a presença da mesma bactéria, Staphylococcus epidermidis, identificada pelo nosso laboratório em culturas de SC5314 e em dados brutos do sequenciamento de SC5314 depositados no GenBank, excluindo a possibilidade de contaminação do nosso laboratório. Ao longo da evolução in vitro, vimos que as células se adaptaram de modo linhagemespecífica, ao passo que a SC5314 não conseguiu sobreviver mais do que 32 semanas na condição que mimetiza o hospedeiro (GTH - meio YPG, 37°C, hipóxia) e que L757 melhorou seu tempo de duplicação nesta condição ao longo da evolução in vitro. Ainda, vimos que as bactérias influenciam em diferentes fenótipos de C. albicans como: (1) a formação de biofilmes mistos de SC5314 foi reduzida; (2) a suscetibilidade ao Voriconazol de SC5314 passou de resistente a hipersensível; (3) o aumento do volume celular das leveduras foi observado quando cultivados juntamente com bactérias. Embora L757 seja mais adaptada, também se tornou hipersensível em hipóxia ao antifúngico Voriconazol, mesmo na ausência de bactérias. Outras linhagens de C. albicans na presença de bactérias em hipóxia também mudaram de resistente a sensíveis ao Voriconazol. SC5314 e L757 também diferiram quanto à formação de biofilme, adesão celular em ágar, hidrofobicidade e comutação de células branca-cinza-opaca. As duas linhagens apresentaram uma maior capacidade de adesão em hipóxia, entretanto, foi notada uma preferência linhagem-específica, SC5314 em normóxia e L757 em hipóxia. Ainda, a evolução in vitro aparentemente promoveu um aumento gradativo da adesão celular, exceto para SC5314 em GTH. SC5314, apesar de aparentemente ser menos adaptada às condições que mimetizam o hospedeiro, apresentou uma maior capacidade de formação de biofilme em todas as condições quando comparada com L757. Ainda, diferente de SC5314 que apresentou comutação de células branca-cinza-opaca apenas a 37°C, L757 mostrou-se mating competente (células opacas e cinzas) independente da condição de crescimento. O número de mitocôndrias viáveis em SC5314 também foram influenciados positivamente pela condição que mimetiza o hospedeiro (GTH) na ausência de bactérias. Contudo nas culturas polimicrobianas as condições com dextrose foram as que apresentaram o maior número de mitocôndrias viáveis por células. Além disso, vimos que a condição GTH modifica a morfologia mitocondrial. Nossos resultados indicam que condições que mimetizam o hospedeiro, em especial em infecções polimicrobianas, podem influenciar diretamente fenótipos relacionados à virulência de C. albicans de uma maneira linhagem-específica.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo comparativo in vitro dos níveis radiográficos de cinza de biomateriais utilizando duas modalidades de imagem digital
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-06-24) Nobrega, Newton Fernando Sobreira [UNIFESP]; Ajzen, Sergio Aron [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Purpose: To compare direct and indirect methods using the Digora for Windows System and the Adobe Photoshop CS2 System. Methods: Samples were made of dental materials, using a matrix of metallic aluminum structure composed of two blocks coupled by a precision connection. The samples were disposed on a radiographic film and on a protected phosphor plate to be radiographed using the indirect and direct methods. The radiographic images were analyzed by the Digora for Windows system and the Adobe Photoshop system which have 256 shades of gray, followed by the delimitation of the standard area for measuring of the shades of gray. Results: The distribution of the shades of gray, analyzed by the direct and indirect methods, suggested that the greater the distance, the longer the time of exposure. Conclusion: The indirect method was a feasible alternative in the evaluation of radiographical shades of gray in dental materials since it presents significant reproductiveness in 0,2s to 0,5s exposure.