Navegando por Palavras-chave "Herpesvirus humano 6"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Otimização de uma estratégia baseada em PCR em tempo-real para detecção e quantificação do DNA do Herpesvirus Humano 6 (HHV-6) em pacientes submetidos a transplante de células progenitoras hematopoiéticas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Ueda, Miriam Yurika Hiramoto [UNIFESP]; Granato, Celso Francisco Hernandes [UNIFESP]; Silva, Celso Arrais Rodrigues da [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6962573800002763; http://lattes.cnpq.br/7880516839350591; http://lattes.cnpq.br/9113900534821590
    O Herpesvirus humano 6 (HHV-6) pode causar graves complicações em pacientes submetidos a transplante de células progenitoras hematopoiéticas (TCPH), como encefalite, atraso na enxertia plaquetaria e agravamento da doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH). Monitorar esse vírus e prover diagnóstico precoce, rápido e preciso das doenças associadas a ele constitui medida essencial para tentar melhorar os resultados do transplante. Até a presente data, não ha estudo prospectivo sobre a incidência e características clinicas das infecções causadas pelos herpes vírus em receptores TCPH no Brasil. Além disso o impacto da maioria das infecções por Herpesvirus após o transplante permanece obscuro. Nosso objetivo foi padronizar uma técnica de detecção rápida, baseada em PCR em tempo real para detectar e quantificar o HHV-6 em amostras de plasma. O teste foi baseado na tecnologia TaqMan® utilizando sonda de hidrolise. As sequencias de primers e sondas previamente descritas foram otimizadas para avaliação da eficiência, sensibilidade e reprodutibilidade. Foi utilizado como controle interno o controle comercial Exogenous Internal Positive Control (IPC) Reagents (Life Technologies) e como controle positivo células infectadas com HHV-6. O DNA foi extraído em robo semi-automatizado (QIAcube); as reações foram preparadas no robo de pipetagem de alta precisão (QIAgility) e todas as reações foram processadas no equipamento 7900HT (Life Technologies). A eficiência obtida foi de 91,5%; range de linearidade de 10 a 106 copias/reação; limite de detecção após análise dos resultados das amostras de plasma foi de 5 copias/reação ou 250 copias/mL de plasma e o valor do range da variação entre ensaios (reprodutibilidade) foi 0,78 a 2,82. Não foram detectados resultados falsos positivos e nem reações cruzadas com outros vírus. O teste foi aplicado a 1.082 amostras de plasma, coletados de 98 receptores de TCPH. O DNA do HHV-6 foi detectado em 18 (2%) amostras de 12 pacientes. A carga viral mais alta detectada foi de 69.163 copias/mL. A técnica de PCR quantitativa padronizada se mostrou simples, rápida, capaz de detectar uma ampla variação da carga viral. Devido ao formato do teste de alta produção, este método pode ser aplicado na monitoração dos pacientes submetidos ao TCPH. O teste parece ser uma boa ferramenta e um potencial meio de fazer o diagnóstico das infecções causadas pelo HHV-6 e realizar pesquisa clínica na área.