Navegando por Palavras-chave "Glicólise"

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    Efeito do desacoplamento da fosforilação oxidativa na criopreservação do sêmen humano
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-03-02) Lima, Bruna Tuani De [UNIFESP]; Nichi, Marcilio [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7054360633543023; http://lattes.cnpq.br/7262889884982858; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Aim: To evaluate the possible protective effect of the decoupling of oxidative phosphorylation and concomitant stimulation of glycolysis during cryopreservation of human spermatozoa. Methods: Each semen collected through the spermogram was divided into two fractions that received the following treatment: (1) simultaneous treatment of oxidative phosphorylation and stimulation of glycolysis (treated group); The aliquots were cryopreserved and analyzed, before and after this process, through evaluations of oxidative status, structural integrity and sperm motility. The obtained data were evaluated and the level of significance used to reject H0 (null hypothesis) was 5%. Results: The aliquots received from the Treated Group showed more cells with intact acrosomes, less DNA fragmentation and better mitochondrial activity compared to the Control Group. Conclusions: From the results obtained, we can conclude that the treatment had a protective effect on human spermatozoa during cryopreservation: (1) preventing cryoinjury, such as high DNA fragmentation and decreased acrosome integrity; (2) maintaining the integrity and activity of mitochondria.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo da acetilação na regulação da enzima glicolítica aldolase de Trypanosoma brucei
    (Universidade Federal de São Paulo, 2019-06-18) Leite, Ariely Barbosa [UNIFESP]; Moretti, Nilmar Silvio [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2131472726202687; http://lattes.cnpq.br/6005925875261882
    Modificações pós-traducionais reversíveis em proteínas são um meio relativamente rápido e econômico para que as células respondam a mudanças ambientais como temperatura e disponibilidade de nutrientes. A acetilação é uma dessas modificações pós-traducionais e ocorre através da transferência de um grupamento acetil do Acetil-CoA para cadeia Nε-amino dos resíduos de lisina, eliminando a carga positiva desse aminoácido. Recentemente, nosso laboratório descreveu o acetiloma das formas procíclicas e sanguíneas do parasito protozoário causador da Tripanossomíase Africana, Trypanosoma brucei, e verificamos que o perfil de acetilação das duas formas é muito distinto. Uma das diferenças observadas foi para as enzimas da via glicolítica, onde níveis maiores de acetilação foram detectados na forma procíclica, que utiliza principalmente fosforilação oxidativa para obtenção de energia, do que na forma sanguínea, cuja principal fonte produtora de energia é através da glicólise. Esses dados sugeriam que a acetilação poderia atuar na regulação da atividade dessas enzimas da via glicolítica em T. brucei, como já verificado para aldolase e glicerol-3-fosfato desidrogenase, em mamíferos. Assim, neste trabalho buscamos investigar o papel da acetilação na regulação da atividade da fructose 1,6-bisfosfato aldolase de T. brucei. Inicialmente, avaliamos o efeito da glicose na regulação dos níveis de acetilação proteica das proteínas totais, mitocôndriais e glicossomais, e verificamos alterações dependendo da disponibilidade ou não de glicose. Em seguida, utilizando extratos totais de procíclicos cultivados na presença ou ausência de glicose dosamos a atividade da aldolase, e detectamos redução significativa da atividade dos extratos de parasitas cultivados na ausência de glicose. A atividade aumenta quando submetemos previamente os extratos a desacetilação in vitro. Uma redução de mais de 50% é observada nos extratos proteicos obtidos de parasitas crescidos em meio contendo glicose após acetilação in vitro. Estes dados foram reforçados através de ensaios de imunoprecipitação de proteínas que mostram um aumento na acetilação da aldolase de procíclicos cultivados na ausência de glicose, comparado com parasitas cultivados na presença de glicose. Através de mutações sítio-dirigidas demonstramos que acetilação na lisina 157 (K157) é capaz de extinguir completamente a atividade in vitro da aldolase do parasita. Além disso, através de análises in silico, de docking e de dinâmica molecular demonstramos que acetilação na K157 afeta o perfil eletrostático do sítio catalítico da enzima, a maneira como o substrato interage com a enzima e afeta a estrutura do sítio catalítico, fazendo com que ele assuma um estado de volume reduzido. Em conjunto, esses dados demonstraram pela primeira vez o papel da acetilação na regulação da atividade de enzimas da via glicolítica de T. brucei, abrindo a possibilidade de explorar o amplo espectro regulatório que esta modificação pós-traducional pode ter neste parasita.
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    Influência da fosforilação oxidativa e via glicolítica na motilidade e aspectos funcionais de espermatozoides humanos
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022) Miralha, Júlia Cunha [UNIFESP]; Lopes, Paula Intasqui [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; http://lattes.cnpq.br/5188240479960852; http://lattes.cnpq.br/5064560388516706
    Apesar da fosforilação oxidativa ser mais eficiente para gerar energia do que a glicólise, a função das mitocôndrias no metabolismo dos espermatozoides ainda não está clara. Estudos indicam que a via glicolítica é tão importante quanto a fosforilação oxidativa para manter o metabolismo espermático; no entanto, informações a respeito da relação entre essas duas vias na motilidade e funcionalidade de espermatozoides humanos ainda é escassa. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar a influência da fosforilação oxidativa e da via glicolítica na motilidade e integridade funcional dos espermatozoides humanos em resposta ao desacoplamento mitocondrial e à inibição glicolítica. Na proposta inicial do projeto, seriam realizados experimentos para determinar a curva dose- resposta para o desacoplador mitocondrial (experimento 1) e para o inibidor glicolítico (experimento 2), para selecionar as concentrações que promoveram o máximo de despolarização mitocondrial e inibição da via glicolítica sem causar disfunções celulares significativas. Para o primeiro experimento, seis amostras foram avaliadas quanto a atividade mitocondrial e motilidade espermáticas, após a incubação com diferentes concentrações do desacoplador mitocondrial carbonil cianida p−trifluorometoxifenilhidrazona (FCCP). Já para o segundo experimento, quatro amostras foram incubadas com diferentes concentrações do inibidor glicolítico 2-deoxi–D–glicose (DOG) e avaliadas quanto a vitalidade e motilidade espermáticas. A atividade mitocondrial e motilidade espermáticas foram avaliadas através da coloração mitocondrial com 3,3’-diaminobenzidina (DAB) e microscopia de campo claro com contraste de fase, respectivamente, enquanto a vitalidade espermática foi analisada através de coloração com eosina-nigrosina. As curvas dose-resposta obtidas nos experimentos 1 e 2 foram analisadas por meio do software Prism 8.4.3 e submetidas à avaliação de regressão linear, para cálculo do IC50 de cada variável a partir da equação da reta. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que, ao contrário do esperado, as doses e protocolos utilizados para a incubação com o desacoplador mitocondrial FCCP e o inibidor glicolítico DOG não causaram alteração significativa na atividade mitocondrial e motilidade espermáticas.