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- ItemAcesso aberto (Open Access)Comparação de diferentes meios para o cultivo ex vivo de células epiteliais do limbo(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Loureiro, Renata Ruoco [UNIFESP]; Nishi, Mauro [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6155425562548936; http://lattes.cnpq.br/2496083182527463; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Objetivo: Comparar a eficacia de tres diferentes meios de cultura para o crescimento, diferenciacao, proliferacao e viabilidade de celulas-tronco epiteliais do limbo cultivadas ex vivo. Metodos: As culturas de celulas epiteliais do limbo foram estabelecidas a partir de 10 rimas corneo-esclerais cultivadas em tres diferentes meios de cultura: Supplemental Hormonal Epithelial Medium (SHEM), Keratinocyte Serum-Free Medium (KSFM) e Epilife. O desempenho das culturas de celulas epiteliais do limbo em cada meio foi avaliado de acordo com os seguintes parametros: area de crescimento e migracao epitelial; imunocitoquimica para ATP-binding cassette member 2 (ABCG2), p63, Ki67, citoqueratina 3 (CK3) e vimentina (VMT); reacao em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) em tempo real para CK3, ABCG2 e p63, e viabilidade celular utilizando a coloracao Hoechst. Resultados: As celulas epiteliais do limbo cultivadas em SHEM apresentaram migracao mais rapida, em comparacao com KSFM e Epilife. A analise imunocitoquimica evidencia que as celulas cultivadas em meio SHEM apresentaram menor expressao de marcadores relacionados com celulas-tronco epiteliais (ABCG2), e celulas indiferenciadas (p63), e maior porcentagem de celulas positivas para epitelio diferenciado (CK3), quando comparado com KSFM e Epilife. Na analise da RT-PCR, a expressao de ABCG2 foi estatisticamente maior para Epilife em comparacao ao SHEM. A expressao de p63 foi estatisticamente maior para Epilife quando comparada com SHEM e KSFM. Por outro lado, expressao de CK3 foi significativamente menor em KSFM quando comparada com SHEM. Conclusao: Com base em nossos resultados, concluimos que as celulas cultivadas nos meios KSFM e Epilife apresentaram maior porcentagem de celulas-tronco epiteliais limbicas, quando comparadas com as celulas cultivadas no meio SHEM
- ItemSomente MetadadadosEfeito da desepitelizacao na sintese de glicosaminoglicanos em corneas humanas mantidas em cultura(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Soriano, Eduardo Sone [UNIFESP]Os objetivos do presente trabalho foram identificar os glicosaminoglicanos presentes na cornea humana, analisar a sintese dos glicosaminoglicanos em corneas humanas mantidas em cultura e avaliar o efeito da remocao do epitelio sobre a sintese destes compostos em corneas mantidas em cultura. Para tal, foram utilizadas corneas do Banco de Olhos do Hospital São Paulo que foram rejeitadas para transplantes. Os glicosaminoglicanos foram extraidos apos proteolise dos tecidos com papaina e identificados por uma combinacao de eletroforese em gel de agarose e degradacao enzimatica com mucopolisacaridases bacterianas especificas. Os principais glicosaminoglicanos extraidos da cornea humana foram o queratam sulfato e o dermatam sulfato, cada um correspondendo a cerca de 50 por cento do total. Para analisar os glicosaminoglicanos sintetizados em cultura, as corneas foram mantidas em meio Fl2, por 24 horas, a 37§C, em atmosfera contendo 2,5 por cento de gas carbonico. Ao meio de cultura foi adicionado 35S-sulfato, de forma que os glicosaminoglicanos sintetizados em 24 horas fossem, entao, metabolicamente marcados. OS 35S-glicosaminoglicanos foram isolados da mesma forma descrita acima, exceto que foram vistos por radioautograma e quantificados em um contador de cintilacoes. O principal glicosaminoglicano sintetizado foi o dermatam sulfato (72 por cento do total), seguido pelo queratam sulfato (l7 por cento). Alem desses dois glicosaminoglicanos, apareceu heparam sulfato (11 por cento), que nao foi identificado como constituinte da cornea por estar em pequena quantidade (abaixo do limite de deteccao do metodo). Esses resultados sugerem que o dermatam sulfato e o heparam sulfato apresentem uma taxa de turnover maior que a do queratam sulfato. A desepitelizacao corneana levou a uma alteracao no padrao de sintese de glicosaminoglicanos, com uma maior marcacao de dermatam sulfato e uma diminuicao no heparam sulfato, em relacao ao controle. Este efeito foi proporcional a area da cornea desepitelizada. Para verificar quais Os glicosaminoglicanos sintetizados em cada camada celular, o epitelio, o endotelio e o estroma foram separados e os glicosaminoglicanos sintetizados em cada uma delas foram identificados. Verificou-se que os ceratocitos foram os principais responsaveis pela sintese de dermatam sulfato e queratam sulfato, enquanto as celulas epiteliais produziram basicamente heparam sulfato. Esta observacao explica a ...(au)
- ItemSomente MetadadadosToxicidade corneo-conjuntival do colirio de iodo-povidona(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Santos, Namir Clementino [UNIFESP]Objetivo : Avaliar a toxicidade ocular do colido de iodo-povidona a 2,5 por cento e a 0,5 por cento sobre a superficie ocular, na regeneracao do epitelio corneal e as alteracoes histopatologicas da cornea. Metodos : Realizou-se estudos experimentais consecutivos em coelhos, albinos, nos quais fez-se a ablacao do epitelio de uma area circular central da cornea de 6,5mm de diametro. Em cada experimento foram utilizados 20 animais (40 olhos), sendo que no olho direito foi instilado o colirio de iodo-povidona (caso) e no olho esquerdo agua destilada (controle), em intervalos de uma hora, durante tres dias consecutivos. Durante o experimento, os animais foram submetidos a exames biomicroscopicos diarios para avaliacao da superficie corneo-conjuntival e foi obtida a medida dos dois maiores diametros ortogonais da lesao, apos instilacao topica de fluoresceina sodica. Realizou-se tambem fotografias seriadas da area sem epitelio, corada com fluoresceina, para medida da area projetada da lesao com auxilio de um analisador de imagem computadorizado. No final do experimento, os animais foram sacrificados para avaliacao histopatologica das corneas. Resultados : O colirio de iodopovidona a 2,5 por cento comprometeu a cicatrizacao epitelial (p=0,087), causou conjuntivite em 100 por cento dos olhos, com producao de secrecao de aspecto mucoso ( 80 por cento dos olhos), ceratite ponteada (40 por cento) e edema estromal leve (10 por cento). Os achados histopatologicos foram ulcera de cornea, degeneracao hidropica das celulas endoteliais em 100 por cento dos casos e infiltrado inflamatorio com predominio de eosinofilos ern 80 por cento dos casos, Nos olhos em que se instilou iodo-povidona a 0,5 por cento, assim como nos controles, observou-se completa cicatrizacao da lesao epitelial (p<0,001) apos 72 horas do inicio do experimento. Do ponto de vista histopatologico comprovou-se, epitelizacao em todos os casos e controles e, em apenas um caso, observou-se discreto infiltrado de leucocitos perilimbicos. Conclusao : A toxicidade ocular do colirio de iodo-povidona e dependente da concentracao da solucao, sendo que o colirio a 2,5 por cento mostrou-se inadequado para utilizacao em intervalos de uma hora e a 0,5 por cento nao causou toxicidade significante
- ItemSomente MetadadadosTransferencia de genes heterologos para celulas corneanas epiteliais primarias EX VIVO utilizando vetor lentivirus(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) Oliveira, Lauro Augusto de [UNIFESP]