Navegando por Palavras-chave "Diferenças do desenvolvimento do sexo"

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    Avaliação da etiologia molecular de casos de DDS 46,XX testicular/ovotesticular SRY-negativo por Sequenciamento Genômico Completo
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-12-12) Neves, Nicolle Pelicer Castro [UNIFESP]; Silva, Magnus Regios Dias [UNIFESP]; Kizys, Marina Malta Letro [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8126556017013838; http://lattes.cnpq.br/2598816440086436; http://lattes.cnpq.br/4212072055759302
    A determinação do sexo em humanos depende do equilíbrio entre as vias de sinalização celular pró-testicular e pró-ovariana, as quais atuam em paralelo e de modo antagônico. No desenvolvimento gonadal típico em indivíduos 46,XY, a expressão do gene SRY atua como gatilho para ativação do fator SOX9 e, por consequência, iniciação de uma programação molecular de determinação pró-testicular. Por outro lado, em indivíduos 46,XX, o fator SOX9 é reprimido por outros fatores, como FOXL2 (via WNT4/ß-catenina), bloqueando o desenvolvimento testicular. Mais de 40 condições distintas resultam de alterações do desenvolvimento gonadal e, atualmente, são agrupadas como Diferenças do Desenvolvimento do Sexo (DDS). Entre essas, a condição de DDS 46,XX testicular/ovotesticular (DDST/OT) compreende aqueles casos em que há desenvolvimento de testículo ou ovotestis em embriões 46,XX. Apesar da translocação do SRY ser uma explicação para parte dos casos de DDST/OT 46,XX, a maioria dos casos SRY-negativos não possuem diagnóstico molecular. Neste projeto, foi investigado a etiologia molecular de três novos casos de DDS 46,XX testicular/ovotesticular SRY-negativo, advindos de três famílias distintas, por meio de Sequenciamento Genômico Completo (WGS), buscando-se por SNPs, Indels, variações de número de cópias (CNVs), ncRNAs candidatos e da inserção de elementos transponíveis em genes candidatos com ferramentas de bioinformática e posterior confirmação por Sequenciamento de Sanger. Desse modo, o objetivo do presente projeto foi identificar novas variantes em regiões codificantes e regulatórias do genoma associadas à DDST/OT SRY-negativo, contribuindo para a elucidação do diagnóstico molecular. O WGS identificou variantes nas regiões não codificantes dos genes NR5A1, SOX9, WT1 e FOXL2NB. Essas variantes foram sequenciadas pela metodologia de Sanger, porém as variantes presentes nos genes NR5A1, WT1 e FOXL2NB não foram confirmadas por este sequenciamento, enquanto a variante no gene SOX9, também estava presente na mãe 46,XX típica, sendo este um critério de descarte. A busca por CNVs não resultou em variantes associadas com o fenótipo. Concluímos esse estudo sugerindo o uso de Sequenciamento de Nova Geração (NGS) com tecnologias mais avançadas de sequenciamento de leituras longas (long-reads).
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    Avaliação de elementos regulatórios e domínios funcionais de SRY na etiologia molecular da disgenesia gonadal 46,XY utilizando diferentes metodologias citogenômicas e moleculares
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-06-27) Ferreira, Karen Rodrigues [UNIFESP]; Silva, Magnus Régios Dias da [UNIFESP]; Ferreira, Lucas Garcia Alves [UNIFESP]; Kizys, Marina Malta Letro [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2251799531659813; http://lattes.cnpq.br/8126556017013838; http://lattes.cnpq.br/2598816440086436; https://lattes.cnpq.br/5804250910667258
    A determinação típica do sexo durante a gestação depende da presença ou ausência do cromossomo (chr) Y, que abriga o gene SRY (Yp11.2), o qual está localizado na fita antissenso e atua como um fator-gatilho para determinação molecular pró-testicular. Variantes patogênicas no SRY estão geralmente associadas à disgenesia gonadal (DG) 46,XY. Tem ficado evidente a importância de se investigar os elementos de regulação da expressão gênica em regiões não codificantes. Por isso, o presente trabalho rastreou variantes e rearranjos estruturais no locus gênico do SRY e regiões flanqueadoras em um caso esporádico e um caso familiar de DG 46,XY na forma completa (DGC), parcial (DGP) ou mista (DGM) acompanhados no Ambulatório de Desenvolvimento do Hospital São Paulo da Universidade Federal de São Paulo. O caso #1 é esporádico e corresponde a um indivíduo com gônada displásica e genitália atípica. O cariótipo por bandamento G no sangue periférico revelou duas linhagens celulares: 45,X,psu dic(22;Y)(p13;p?11.32)[32]/45,X[8]. A reação em cadeia da polimerase (PCR) seguida do sequenciamento do tipo Sanger demonstrou a presença do gene SRY sem variantes. O whole genome sequecing (WGS) foi utilizado para auxiliar na determinação dos pontos de quebra da translocação. Contudo, não foi possível a avaliação da região do rearranjo cromossômico. O cariótipo sugeriu que o ponto de quebra da translocação é mais telomérico em relação ao SRY. Perda de segmentos genômicos a jusante do SRY que se estendem até a banda Yp11.32 já foram associadas a casos de DGP 46,XY. Por isso, realizamos a técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH) com sonda para o gene SHOX em sangue periférico para estimar o tamanho da perda da banda Yp11.32. No entanto, houve falha na hibridização das sondas. Já FISH em tecido testicular evidenciou a presença do SHOX, demonstrando que o ponto de quebra está a mais de 2 Mb em região mais telomérica que o SRY. A técnica de mapeamento óptico do genoma (OGM) foi também realizada para auxiliar na investigação dos segmentos genômicos envolvidos com a translocação. Embora tenha corroborado a presença de uma população de células 45,X, o OGM não identificou a translocação Y;22 observada pelo cariótipo. A partir desses dados, o caso #1 foi reclassificado como DGM 45,X/46,XY, tendo a haploinsuficiência do mosaicismo como etiologia molecular. O caso #2 é familiar, sendo que o probando #2.1 apresenta DGC 46,XY, seu meio-irmão #2.2 apresenta desenvolvimento testicular típico e seu sobrinho #2.3 (filho de #2.2) tem DGP 46,XY. Apesar da variabilidade fenotípica, dados anteriores demonstraram que os três membros estudados dessa família apresentam duplicação de 17 pb no gene SRY, a qual leva à variação no domínio C-terminal da proteína SRY (p.Tyr198CysfsX18). Investigamos se variantes em outros genes relacionados a diferenças de desenvolvimento do sexo (DDS) poderiam explicar essa variabilidade por WGS. Não foram encontradas outras variantes patogênicas que segregam com o fenótipo. Para investigar o efeito dessa variante sobre a atividade do SRY, realizamos um ensaio dual-luciferase para fatores de transcrição, porém a resposta de um dos controles do experimento não foi como esperada.