Caracterização molecular da família de proteínas SAP (Serine-, Alanine-, and Proline-Rich protein) de Trypanosoma cruzi e seu papel na invasão da celula hospedeira
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Data
2005
Autores
Andreoli, Renata Cristina Pardos Baida [UNIFESP]
Orientadores
Silveira, Jose Franco da [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
As proteínas de superfícies de T cruzi estão envolvidas na interação do parasita com a célula hospedeira. A maioria dos genes que codificam estas proteínas pertencem a super-família das gp85/sialidases e a família das mucinas. Com intuito de estudar os genes de tripomastigotas metacíclicos nós isolamos seqüências genômicas e de cDNA que codificam uma proteína rica em resíduos de serina, alanina e prolina. A proteína SAP apresenta peptídeos que contêm diversas repetições (P2-4, S2-3, A2-3, AS, SA, P A, AP, SP, PS, and TP) e que são parcialmente similares aos motivos de serina, alanina e prolina de proteofosfoglicanos de Leishmanina mexicana e Leishmania major. Neste trabalho mostraremos a caracterização genômica e funcional da família SAP. Quando a seqüência sap foi comparada com as seqüências depositadas no banco de dados "GeneDB", 34 contigs apresentaram alta similaridade com a fase aberta de leitura do gene sapo Estes fragmentos codificam proteínas que foram agrupadas em quatro diferentes famílias, SAP 1, 2, 3 e 4. Estas proteínas apresentam identidade com as regiões N-terminal e central da proteína SAP da cepa G. SAP 1 possui peptídeo sinal e sinal para âncora GPI, SAP 2 possui peptídeo sinal mas não apresenta âncora GPI; SAP 3 possui um sinal para ancoramento e sinal para adição de âncora GPI; a região N-terminal de SAP 4 apresenta similaridade com a "gag-related protein". A análise das regiões próximas ao gene sap nos contigs mostrou que freqüentemente estes genes estão ligados à família das mucinas, sialidases e retrotransposons. Estes dados, juntamente com a hibridização com sonda sap do "Southem blot" com DNA da cepa G e do clone CL/Brener confirmam que a seqüência sap pertence a uma família de genes polimórfica. A transcrição dos genes sap em epimastigotas e tripomastigotas metacíclicos também foi analisada. A comparação desta seqüência com "ESTs" depositados no banco de dados "GenBank" revelou que três clones de cDNA de epimastigotas apresentavam similaridade com a família sapo Uma fase aberta de leitura que codifica uma proteína com alta similaridade com a família SAP 1 foi isolada por meio de RT-PCR no cDNA de tripomastigotas metacíclicos da cepa G. Proteínas nativas de T cruzi que compartilham epítopos com a proteína SAP foram identificadas com o uso de soro anti-SAP. Por meio de "immunolotting" e gel bidimensional foram encontradas várias proteínas que reagiram fortemente com o soro anti-SAP. Foram realizados ensaios biológicos para investigar o papel funcional da proteína recombinante SAP. A proteína SAP foi capaz de aderir às células HeLa de um...(au).
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2005. 110 p.