Caracterização morfo-citoquímica, imunocitoquímica e ultraestrutural das células sanguíneas do robalo peva Centropomus parallelus (Poey, 1860)
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Data
2010-08-25
Autores
Silva, Wemeson Ferreira da [UNIFESP]
Orientadores
Egami, Mizue Imoto [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Resumo
Fifteen individuals of fat snook, Centropomus parallelus, a fish living in estuaries and lagoons in Cananéia, a coastline city in the state of São Paulo, were studied. Their morphological analysis was performed after Rosenfeld and Laür staining. The histochemical analysis included PAS, Sudan Black B, and the detection of myeloperoxidase, acidic and alkaline phosphatase, and esterase. The indirect immunohistochemical avidin-biotin-complex method was used to detect the metaloproteinases MMP2 and 9. The ultra-structural analysis was carried out on leucocytes fixed in Karnovsky fixative and processed conventionally for MET. The analysis of Centropomus parallelus blood evidenced 5 cell types: erythrocytes, thrombocytes, neutrophils, lymphocytes and monocytes. Erithrocytes were found to be either round, slightly elliptical or elliptical with their single nucleus having the same cell shape. After Laür staining, young erithrocytes (or reticulocytes), which are either round or slightly elliptical with grayish cytoplasm, showed a reticular blue staining indicative of ribonucleoprotein. Thrombocytes are round or elliptical with their nucleus having the same cell shape surrounded by a hyaline or slightly acidophilic cytoplasm, which contains glycogen and is slightly positive for esterase. Neutrophils are usually round with either a round, slanting-sided or offcentered bilobed nucleus in a clear cytoplasm frequently showing basophilic bodies. These cells were positive for glycogen, myeloperoxidase, acid phosphatase, Sudan Black B stainable cell structures, esterase and metaloproteinases 2 and 9. Limphocytes were round having a large round nucleus with slightly indented border leaving little room for basophilic cytoplasm. These cell were positive for acid phosphatase and esterase. Monocytes were round with a slightly off-centered, deeply indented slanting-sided nucleus surrounded by a basophilic cytoplasm frequently containing vacuoles. These cells were positive for acid phosphatase and esterase. Ultra-structurally, young erithrocytes showed a round nucleus whereas mature one had an elliptical nucleus, with heterochromatin predomining both surrounded by a cytoplasm of granular appearance and abundant polyribosomes – mainly in young ells – mitochondria and microtubules. Thrombocytes showed either grossly hound a slanting-sided or elongated nucleus with heterochromatin predomining, staining, nuclear pores. Their cytoplasm contained vesicles, a net of tubules (canalicular system), and occasional phagocytic debris. Neutrophils showed either a round, off centered or bilobed nucleus with core euchromatin, nuclear pores, and cytoplasm containing round granules, endocytic vesicles, rough endoplasmatic reticulum, free ribosomes and fine twisted mitochondria. Limphocytes had a round nucleus with core euchromatin leaving little room for cytoplasm containing few electron-dense round granules, few mitochondria and small electron-lucid vesicles. Monocytes showed extended cytoplasmatic projections, an euchromatic nuclear core, a thin heterochromatic layer bordering the nuclear membrane internally, an evident nucleolus, and cytoplasm containing electron-dense granules varying in size, mitochondria, vacuoles and vesicles.
Foram utilizados 15 peixes da espécie Centropomus parallelus conhecida como robalo peva provenientes da região estuarino-lagunar de Cananéia Estado de São Paulo. A análise morfológica foi realizada em preparações coradas pelo método de Rosenfeld e Laür. Para estudo citoquímico foram empregados os seguintes métodos: PAS, Sudan Black B, detecção da mieloperoxidase, da fosfatase ácida, da fosfatase alcalina e da esterase. Para a demonstração das metaloproteinases MMP 2 e 9 foi empregado o método imunocitoquímico indireto utilizando-se o complexo avidina-biotina-peroxidase. Para a análise ultra-estrutural, após centrifugação do sangue total, o creme leucocitário foi fixado em Karnovsky e processado segundo o método convencional para MET. No sangue do Centropomus parallelus foram encontrados 5 tipos de células: eritrócitos, trombócitos, neutrófilos, linfócitos e monócitos. Os eritrócitos apresentaram formas esférica, oval ou elíptica e o núcleo acompanhando a forma da célula. Os eritrócitos jovens, isto é, os reticulócitos, de aspecto esférico ou oval e citoplasma acinzentado. Quando corados pelo método de Laür (coloração vital) mostraram um precipitado de cor azul em forma de rede indicando a presença de ribonucleoproteína. Os trombócitos apresentaram forma elíptica ou esférica, núcleo acompanhando a forma da célula, citoplasma hialino ou discretamente acidófilo contendo glicogênio e demonstrando fraca positividade para esterase. Os neutrófilos, geralmente esféricos, mostraram núcleo esférico, chanfrado ou bilobulado excentrico, de citoplasma claro, apresentando com freqüência corpos basófilos. Citoquimicamente observou-se positividade para glicogênio, mieloperoxidase, fosfatase ácida, Sudan Black B e esterase. Após a aplicação do método imunocitoquímico, obsevou-se a presença das metaloproteinases 2 e 9. Os linfócitos apresentaram-se esféricos, com núcleo esférico discretamente indentado e citoplasma escasso, basófilo com projeções. Citoquimicamente apresentaram reação positiva para fosfatase ácida e esterase. Os monócitos são esféricos, com núcleo chanfrado ligeiramente deslocado, de citoplasma basófilo, frequentemente vacuolizado. Mostraram reação citoquimica positiva para fosfatase ácida e esterase. Quanto à ultra-estrutura, os eritrócitos jovens e maduros apresentaram respectivamente núcleo esférico e alongado com predominância de heterocromatina central principalmente nas formas maduras e presença de poros nucleares. O citoplasma, finamente granular, caracterizou-se pela riqueza em polirribossomos, principalmente na forma jovem, mitocôndrias e microtúbulos. Os trombócitos apresentaram núcleo grosseiramente redondo ou alongado, com predominância de heterocromatina, poros nucleares, citoplasma com vesículas, eventualmente material fagocitado e redes de tubos do sistema canalicular. Os neutrófilos apresentaram núcleo esférico, chanfrado ou bilobulado com eucromatina central, poros nucleares, citoplasma contendo grânulos esféricos, vesículas endocíticas, reticulo endoplasmático granular, ribossomos livres e mitocôndrias curvas de aspecto fino e retorcido. Os linfócitos apresentaram núcleo esférico, com eucromatina central, citoplasma escasso, com poucos grânulos esféricos eletron-densos, poucas mitocôndrias e pequenas vesículas eletron-lucidas. Os monócitos apresentaram extensas projeções citoplasmáticas, núcleo eucromático na região central, delgada camada heterocromática associada à porção interna da membrana, poros nucleares, nucléolo bem evidente, citoplasma contendo grânulos eletron-densos de tamanho variado, mitocôndrias, vacúolos e vesículas.
Foram utilizados 15 peixes da espécie Centropomus parallelus conhecida como robalo peva provenientes da região estuarino-lagunar de Cananéia Estado de São Paulo. A análise morfológica foi realizada em preparações coradas pelo método de Rosenfeld e Laür. Para estudo citoquímico foram empregados os seguintes métodos: PAS, Sudan Black B, detecção da mieloperoxidase, da fosfatase ácida, da fosfatase alcalina e da esterase. Para a demonstração das metaloproteinases MMP 2 e 9 foi empregado o método imunocitoquímico indireto utilizando-se o complexo avidina-biotina-peroxidase. Para a análise ultra-estrutural, após centrifugação do sangue total, o creme leucocitário foi fixado em Karnovsky e processado segundo o método convencional para MET. No sangue do Centropomus parallelus foram encontrados 5 tipos de células: eritrócitos, trombócitos, neutrófilos, linfócitos e monócitos. Os eritrócitos apresentaram formas esférica, oval ou elíptica e o núcleo acompanhando a forma da célula. Os eritrócitos jovens, isto é, os reticulócitos, de aspecto esférico ou oval e citoplasma acinzentado. Quando corados pelo método de Laür (coloração vital) mostraram um precipitado de cor azul em forma de rede indicando a presença de ribonucleoproteína. Os trombócitos apresentaram forma elíptica ou esférica, núcleo acompanhando a forma da célula, citoplasma hialino ou discretamente acidófilo contendo glicogênio e demonstrando fraca positividade para esterase. Os neutrófilos, geralmente esféricos, mostraram núcleo esférico, chanfrado ou bilobulado excentrico, de citoplasma claro, apresentando com freqüência corpos basófilos. Citoquimicamente observou-se positividade para glicogênio, mieloperoxidase, fosfatase ácida, Sudan Black B e esterase. Após a aplicação do método imunocitoquímico, obsevou-se a presença das metaloproteinases 2 e 9. Os linfócitos apresentaram-se esféricos, com núcleo esférico discretamente indentado e citoplasma escasso, basófilo com projeções. Citoquimicamente apresentaram reação positiva para fosfatase ácida e esterase. Os monócitos são esféricos, com núcleo chanfrado ligeiramente deslocado, de citoplasma basófilo, frequentemente vacuolizado. Mostraram reação citoquimica positiva para fosfatase ácida e esterase. Quanto à ultra-estrutura, os eritrócitos jovens e maduros apresentaram respectivamente núcleo esférico e alongado com predominância de heterocromatina central principalmente nas formas maduras e presença de poros nucleares. O citoplasma, finamente granular, caracterizou-se pela riqueza em polirribossomos, principalmente na forma jovem, mitocôndrias e microtúbulos. Os trombócitos apresentaram núcleo grosseiramente redondo ou alongado, com predominância de heterocromatina, poros nucleares, citoplasma com vesículas, eventualmente material fagocitado e redes de tubos do sistema canalicular. Os neutrófilos apresentaram núcleo esférico, chanfrado ou bilobulado com eucromatina central, poros nucleares, citoplasma contendo grânulos esféricos, vesículas endocíticas, reticulo endoplasmático granular, ribossomos livres e mitocôndrias curvas de aspecto fino e retorcido. Os linfócitos apresentaram núcleo esférico, com eucromatina central, citoplasma escasso, com poucos grânulos esféricos eletron-densos, poucas mitocôndrias e pequenas vesículas eletron-lucidas. Os monócitos apresentaram extensas projeções citoplasmáticas, núcleo eucromático na região central, delgada camada heterocromática associada à porção interna da membrana, poros nucleares, nucléolo bem evidente, citoplasma contendo grânulos eletron-densos de tamanho variado, mitocôndrias, vacúolos e vesículas.
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Citação
SILVA, Wemeson Ferreira da. Caracterização morfo-citoquímica, imunocitoquímica e ultraestrutural das células sanguíneas do robalo peva Centropomus parallelus (Poey, 1860). 2010. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2010.