Mecanismo de ação do inibidor de planta EcTI e de um peptídeo derivado em melanoma
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Data
2020-01-30
Autores
Bonturi, Camila Ramalho [UNIFESP]
Orientadores
Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Resumo
Melanoma is a highly malignant cancer and the treatment commonly used is surgical remotion. The available treatments have several side effects and many of them show low efficacy due to the lack of specificity of the compounds. As a result, finding target molecules is a major challenge in oncology. Given that proteases play an important role in tumor development and progression, the purpose of this paper is to investigate the antitumor properties of the purified and isolated EcTI inhibitor of Enterolobium contortisiliquum seeds and a structurally related peptide in cell lines (B16F10- nex2, SK-MEL-28, CHL-1 and HUVEC), with subsequent evaluation in vivo. EcTI and its peptide fragment blocked several important processes of carcinogenesis. Cellular responses did not follow a single pattern; however, the final event was blockade of proliferation, migration and invasion of all tumor cells analyzed, accompanied by decreased membrane potential and intracellular calcium release. In general, EcTI reduced the expression of cell migration, adhesion, and invasion-related proteins, such as FAK and Src, as well as cell death-associated proteins, especially increased BAX and reduced BCL-2. Cell adhesion was mainly influenced by fibronectin and laminin molecules. Autophagy induction was observed, which also interrelates with the cellular apoptosis event, due to the increase of the LC3 protein, an important marker of autophagolysosomes. All of these events were confirmed by cellular changes observed in transmission electron microscopy, with increased apoptotic bodies, invaginations, changing in mitochondria. The peptide, on the other hand, caused endoplasmic reticular swelling, with no apparent mitochondrial morphological alteration. In addition, the in vivo results indicated that the EcTI decreased the tumor mass of mice at dose of 8 mg/kg, while the peptide decreases tumor volume by 4 mg/kg. Results indicate that these compounds are promising in reducing melanoma progression.
O melanoma é um câncer altamente maligno e o tratamento comumente utilizado é a remoção cirúrgica. Os tratamentos disponíveis apresentam diversos efeitos secundários e muitos deles demonstram baixa eficácia devido à falta de especificidade dos compostos. Em consequência, a busca de moléculas alvo constitui-se um grande desafio na oncologia. Tendo em vista que as proteases desempenham importante papel no desenvolvimento e progressão tumoral, a proposta do trabalho foi investigar as propriedades antitumorais do inibidor EcTI, purificado das sementes de Enterolobium contortisiliquum, e de um peptídeo estruturalmente relacionado, em linhagens celulares (B16F10-nex2, SK-MEL-28, CHL-1 e HUVEC), com posterior avaliação in vivo. O EcTI e seu fragmento peptídico bloquearam vários processos da carcinogênese. As respostas celulares não obedeceram um padrão único, no entanto o evento final foi o bloqueio da proliferação, migração e invasão de todas as células tumorais analisadas, acompanhado da diminuição do potencial de membrana e liberação de cálcio intracelular. Em geral, o EcTI reduziu a expressão das proteínas relacionadas a migração, adesão e invasão celular, como FAK e Src, bem como proteínas associadas a morte celular, especialmente aumento de BAX e redução de BCL-2. A adesão celular foi influenciada principalmente pelas moléculas de fibronectina e laminina. A indução de autofagia, que também se interrelaciona com o evento de apoptose celular, foi detectada pelo aumento da proteína LC3, importante marcador de autofagolisossomos. Todos esses eventos foram confirmados pelas alterações celulares detectadas pela microscopia eletrônica de transmissão, como o aumento de corpos apoptóticos, invaginações, alterações das mitocôndrias. O peptídeo, por outro lado, mostrou edema reticular endoplasmático, sem alteração morfológica mitocondrial aparente. Ainda, os resultados in vivo mostraram que o EcTI diminuiu a massa tumoral dos camundongos nas doses de 8 mg/kg, e o peptídeo já é eficaz com 4 mg/kg. Os resultados indicam que esses compostos são promissores na redução da progressão do melanoma.
O melanoma é um câncer altamente maligno e o tratamento comumente utilizado é a remoção cirúrgica. Os tratamentos disponíveis apresentam diversos efeitos secundários e muitos deles demonstram baixa eficácia devido à falta de especificidade dos compostos. Em consequência, a busca de moléculas alvo constitui-se um grande desafio na oncologia. Tendo em vista que as proteases desempenham importante papel no desenvolvimento e progressão tumoral, a proposta do trabalho foi investigar as propriedades antitumorais do inibidor EcTI, purificado das sementes de Enterolobium contortisiliquum, e de um peptídeo estruturalmente relacionado, em linhagens celulares (B16F10-nex2, SK-MEL-28, CHL-1 e HUVEC), com posterior avaliação in vivo. O EcTI e seu fragmento peptídico bloquearam vários processos da carcinogênese. As respostas celulares não obedeceram um padrão único, no entanto o evento final foi o bloqueio da proliferação, migração e invasão de todas as células tumorais analisadas, acompanhado da diminuição do potencial de membrana e liberação de cálcio intracelular. Em geral, o EcTI reduziu a expressão das proteínas relacionadas a migração, adesão e invasão celular, como FAK e Src, bem como proteínas associadas a morte celular, especialmente aumento de BAX e redução de BCL-2. A adesão celular foi influenciada principalmente pelas moléculas de fibronectina e laminina. A indução de autofagia, que também se interrelaciona com o evento de apoptose celular, foi detectada pelo aumento da proteína LC3, importante marcador de autofagolisossomos. Todos esses eventos foram confirmados pelas alterações celulares detectadas pela microscopia eletrônica de transmissão, como o aumento de corpos apoptóticos, invaginações, alterações das mitocôndrias. O peptídeo, por outro lado, mostrou edema reticular endoplasmático, sem alteração morfológica mitocondrial aparente. Ainda, os resultados in vivo mostraram que o EcTI diminuiu a massa tumoral dos camundongos nas doses de 8 mg/kg, e o peptídeo já é eficaz com 4 mg/kg. Os resultados indicam que esses compostos são promissores na redução da progressão do melanoma.