Efeitos do resveratrol sobre parâmetros espermáticos, capacidade reprodutiva e qualidade de embriões concebidos por ratos adultos, submetidos à cirurgia para indução de varicocele esquerda, na peripuberdade
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Data
2019-09-26
Autores
Mendes, Talita Biude [UNIFESP]
Orientadores
Valdeolivas, Sandra Maria Miraglia [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Resumo
Varicocele is the most common cause of male infertility and is related to increased oxidative stress. Oxidative stress causes damage to the plasma membrane, mitochondria and sperm DNA, affecting viability, capacity building and reaction Acrosomal. Resveratrol, a natural phytoalexin, has antioxidant and anti-apoptotic effects. The aim of the present study was to investigate the role of resveratrol on parameters reproductive disorders and oxidative stress in adult rats (Wistar lineage) presenting varicocele induced from peripuberty. Two hundred and fifty-six male rats peripúberes (41 dpp), were distributed in 4 experimental groups: Sham Control (S); Varicocele (V); Resveratrol (R) and Varicocele treated with resveratrol (VR). Varicocele left was induced in animals of groups V and VR, through partial ligation of the vein left kidney (diameter pattern, an epidural catheter). Group S animals were submitted to the surgical procedure, but did not have ligation of the renal vein and received treatment with carboxymethylcellulose (resveratrol vehicle). The R and VR groups received 300mg / kg body weight / day of resveratrol (gavage) in the morning. To 100dpp the animals were euthanized, the reproductive organs were collected for biometric evaluation. In addition, testis and epididymis were collected for evaluation quantitative sperm, calculation of the daily production of sperm (testis) and the sperm transit (epididymis). A group of epididymis were fixed and processed for performing histopathological, morphometric analysis and apoptosis cell marking (TUNEL method). Another group of testicles and epididymis were collected and frozen at - 80ºC for protein analysis and expression of BAX and Bcl-2 genes, da activity catalase enzyme and oxidative stress (TBARS method and lipid hydroperoxide). Spermatozoa were collected from the epididymal tail for viability analysis, training and acrosomal reaction, chromatin structure (Orange Acridine Assay and staining with CMA3), lipid peroxidation (BODIPY probe), production of reactive species oxygen (DCFH-DA probe), mitochondrial function (Mitotracker green FM) and activity of the cytochrome c oxidase enzyme. In varicocellized animals, all of these parameters were analyzed bilaterally and a group average was performed. Eight animals from each group experimental were allocated, at 100dpp, for the evaluation of reproductive capacity and quality of conceived pre-implanted embryos. The data were submitted to analysis statistic. The varicocele group (V) showed significant changes in the parameters of testicular weight, axis and volume, the frequency of TUNEL-positive cells in the epididymis, the absolute number of sperm and transit time in the portion of the epididymal tail, in oxidative stress at testicular and epididymal level (OLP and MDA), relative expression the BAX protein in the epididymal tail portion and the expression of the BAX and Bcl-2 genes in testicle. This group V showed significant changes in the following parameters sperm: viability, mitochondrial function, cytochrome c oxidase function, training, chromatin structure, lipid peroxidation and ROS production. Besides that, animals in group V showed a significant reduction in testosterone levels plasma and intratesticular, as well as the quality and development of embryos from the mating of these animals beyond the gestation index. Treatment of varicocellised animals with resveratrol caused improvement and / or normalization of many of these parameters resulting in a reestablishment of the gestational index of the animals of that group, which reinforces the beneficial effects of resveratrol on varicocele. These results suggest that the daily administration of resveratrol to varicocellized rats, starting from the peripuberty, acts positively on reproductive parameters, reducing damage caused by oxidative stress, at testicular and epididymal levels, resulting in improved sperm quality and reproductive capacity in adulthood.
A varicocele é a causa mais comum de infertilidade masculina e está relacionada ao aumento do estresse oxidativo. O estresse oxidativo provoca danos na membrana plasmática, nas mitocôndrias e no DNA do espermatozoide, afetando a viabilidade, capacitação e reação acrossômica. O resveratrol, fitoalexina natural, possui efeitos antioxidante e antiapoptótico. O objetivo do presente estudo foi investigar o papel do resveratrol sobre parâmetros reprodutivos e o estresse oxidativo de ratos adultos (linhagem Wistar) apresentando varicocele induzida a partir da peripuberdade. Duzentos e cinquenta e seis ratos machos peripúberes (41 dpp), foram distribuídos em 4 grupos experimentais: Controle Sham (S); Varicocele (V); Resveratrol (R) e Varicocele tratados com resveratrol (VR). A varicocele esquerda foi induzida nos animais dos grupos V e VR, através de ligadura parcial da veia renal esquerda (padrão de diâmetro, um cateter de peridural). Os animais do grupo S foram submetidos ao procedimento cirúrgico, porém não tiveram a ligadura da veia renal e receberam tratamento com carboximetilcelulose (veículo do resveratrol). Os grupos R e VR receberam, matinalmente, 300mg/Kg de peso corpóreo/dia de resveratrol (gavagem). Aos 100dpp os animais foram submetidos à eutanásia, foram coletados os órgãos reprodutivos para avaliação biométrica. Além disso, coletou-se testículo e epidídimos para avaliação espermática quantitativa, cálculo da produção diária de espermatozoides (testículo) e do trânsito espermático (epidídimo). Um grupo de epidídimos foram fixados e processados para realização de análises histopatológica, morfométrica e marcação de células em apoptose (método TUNEL). Outro grupo de testículos e epidídimos foram coletados e congelados a - 80ºC para análises das proteínas e expressão dos genes BAX e Bcl-2, da atividade de da enzima catalase e do estresse oxidativo (método TBARS e hidroperóxido lipídico). Espermatozoides foram coletados da cauda epididimária para as análises de viabilidade, capacitação e reação acrossômica, estrutura da cromatina (Ensaio de Acridina Laranja e coloração com CMA3), peroxidação lipídica (sonda BODIPY), produção de espécies reativas de oxigênio (sonda DCFH-DA), função mitocondrial (Mitotracker green FM) e da atividade da enzima citocromo c oxidase. Nos animais varicocelizados, todos esses parâmetros foram analisados bilateralmente e foi realizada uma média do grupo. Oito animais de cada grupo experimental foram destinados, aos 100dpp, para a avaliação da capacidade reprodutiva e da qualidade dos embriões pré-implantados concebidos. Os dados foram submetidos à análise estatística. O grupo varicocele (V) apresentou alterações significantes dos parâmetros de peso, eixo e volume testicular, da frequência de células TUNEL-positivas no epidídimo, do número absoluto de espermatozoides e no tempo de trânsito na porção de cauda epididimária, no estresse oxidativo em nível testicular e epididimário (LPO e MDA), da expressão relativa da proteína BAX na porção de cauda epididimária e da expressão dos genes BAX e Bcl-2 no testículo. Esse grupo V apresentou alterações significantes dos seguintes parâmetros espermáticos: viabilidade, função mitocondrial, função da enzima citocromo c oxidase, capacitação, estrutura da cromatina, peroxidação lipídica e produção de EROs. Além disso, os animais do grupo V apresentaram uma redução significante dos níveis de testosterona plasmática e intratesticular, como também da qualidade e do desenvolvimento dos embriões proveniente do acasalamento desses animais além do índice de gestação. O tratamento de animais varicocelizados com resveratrol causou melhora e/ou normalização de muitos desses parâmetros resultando em um reestabelecimento do índice gestacional dos animais desse grupo, o que reforça os efeitos benéficos do resveratrol na varicocele. Esses resultados sugerem que a administração diária do resveratrol em ratos varicocelizados, a partir da peripuberdade, atua positivamente sobre parâmetros reprodutivos, reduzindo os danos causados pelo estresse oxidativo, em nível testicular e epididimário, resultando em melhora da qualidade espermática e da capacidade reprodutiva, na fase adulta.
A varicocele é a causa mais comum de infertilidade masculina e está relacionada ao aumento do estresse oxidativo. O estresse oxidativo provoca danos na membrana plasmática, nas mitocôndrias e no DNA do espermatozoide, afetando a viabilidade, capacitação e reação acrossômica. O resveratrol, fitoalexina natural, possui efeitos antioxidante e antiapoptótico. O objetivo do presente estudo foi investigar o papel do resveratrol sobre parâmetros reprodutivos e o estresse oxidativo de ratos adultos (linhagem Wistar) apresentando varicocele induzida a partir da peripuberdade. Duzentos e cinquenta e seis ratos machos peripúberes (41 dpp), foram distribuídos em 4 grupos experimentais: Controle Sham (S); Varicocele (V); Resveratrol (R) e Varicocele tratados com resveratrol (VR). A varicocele esquerda foi induzida nos animais dos grupos V e VR, através de ligadura parcial da veia renal esquerda (padrão de diâmetro, um cateter de peridural). Os animais do grupo S foram submetidos ao procedimento cirúrgico, porém não tiveram a ligadura da veia renal e receberam tratamento com carboximetilcelulose (veículo do resveratrol). Os grupos R e VR receberam, matinalmente, 300mg/Kg de peso corpóreo/dia de resveratrol (gavagem). Aos 100dpp os animais foram submetidos à eutanásia, foram coletados os órgãos reprodutivos para avaliação biométrica. Além disso, coletou-se testículo e epidídimos para avaliação espermática quantitativa, cálculo da produção diária de espermatozoides (testículo) e do trânsito espermático (epidídimo). Um grupo de epidídimos foram fixados e processados para realização de análises histopatológica, morfométrica e marcação de células em apoptose (método TUNEL). Outro grupo de testículos e epidídimos foram coletados e congelados a - 80ºC para análises das proteínas e expressão dos genes BAX e Bcl-2, da atividade de da enzima catalase e do estresse oxidativo (método TBARS e hidroperóxido lipídico). Espermatozoides foram coletados da cauda epididimária para as análises de viabilidade, capacitação e reação acrossômica, estrutura da cromatina (Ensaio de Acridina Laranja e coloração com CMA3), peroxidação lipídica (sonda BODIPY), produção de espécies reativas de oxigênio (sonda DCFH-DA), função mitocondrial (Mitotracker green FM) e da atividade da enzima citocromo c oxidase. Nos animais varicocelizados, todos esses parâmetros foram analisados bilateralmente e foi realizada uma média do grupo. Oito animais de cada grupo experimental foram destinados, aos 100dpp, para a avaliação da capacidade reprodutiva e da qualidade dos embriões pré-implantados concebidos. Os dados foram submetidos à análise estatística. O grupo varicocele (V) apresentou alterações significantes dos parâmetros de peso, eixo e volume testicular, da frequência de células TUNEL-positivas no epidídimo, do número absoluto de espermatozoides e no tempo de trânsito na porção de cauda epididimária, no estresse oxidativo em nível testicular e epididimário (LPO e MDA), da expressão relativa da proteína BAX na porção de cauda epididimária e da expressão dos genes BAX e Bcl-2 no testículo. Esse grupo V apresentou alterações significantes dos seguintes parâmetros espermáticos: viabilidade, função mitocondrial, função da enzima citocromo c oxidase, capacitação, estrutura da cromatina, peroxidação lipídica e produção de EROs. Além disso, os animais do grupo V apresentaram uma redução significante dos níveis de testosterona plasmática e intratesticular, como também da qualidade e do desenvolvimento dos embriões proveniente do acasalamento desses animais além do índice de gestação. O tratamento de animais varicocelizados com resveratrol causou melhora e/ou normalização de muitos desses parâmetros resultando em um reestabelecimento do índice gestacional dos animais desse grupo, o que reforça os efeitos benéficos do resveratrol na varicocele. Esses resultados sugerem que a administração diária do resveratrol em ratos varicocelizados, a partir da peripuberdade, atua positivamente sobre parâmetros reprodutivos, reduzindo os danos causados pelo estresse oxidativo, em nível testicular e epididimário, resultando em melhora da qualidade espermática e da capacidade reprodutiva, na fase adulta.