Análise da resposta inflamatória em camundongos com deficiência colinérgica em longo prazo
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Data
2017-12-15
Autores
Santos, Paula Cassanelli [UNIFESP]
Orientadores
Prado, Carla Maximo [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
The cholinergic anti-inflammatory system has been studied in several diseases and has been shown to break in this way worsen the inflammation of the organism. A cholinergic deficiency caused by the reduction in the expression of the acetylcholine vesicular carrier protein (VAChT), responsible for the transport of acetylcholine (ACh) into the vesicles, is closely related to the reduction of ACh release. Our group recently demonstrated that animals with VAChT reduction had pulmonary inflammation in mice at 3 months of age. For more than 12 months, the age corresponding to the onset of senility and that there is a greater possibility of pulmonary injury. Objective: compare pulmonary inflammation induced by VAChT reduction in animals at 3 months and 12 months of age. Materials and Methods: They were allowed with 3 and 12 months old wild or mutants for VAChT. The animals were weighed and subjected to the Wire Hang test. After anesthesia, bronchoalveolar lavage (BAL) was removed for quantification of cells and cytokines. Empu, blood, lung, spleen, thymus and uterus were collected for further analysis. Cells were also quantified in the bone marrow and cytokine levels in the spleen, in addition to the level of estrogen in the blood and nitrite and nitrate in the lung. The data were statistically analyzed by the Sigma Statistics program and significant material for a <0.05. Results: All animals with VAChT reduction had a reduction in their class time (P <0.001) and body mass (P <0.01) in relation to their wild-type controls. Still, the wild animals with 12 months had a reduction in the time of support in the note in relation to the wild ones with 3 months (P≤0.001). The mutant animals showed a decrease in total cells in the bone marrow (P <0.05), increased total number of cells without BAL (P <0.05), and eosinophils (P <0.05). levels of TNF-α, IL-6, IL-8 and IL-1β (P <0.01) and collagen fiber deposition at 3 months compared to wild animals of the same age. At 12 months, as non-lung cells and cytokines as reductions in mutants (P <0.05) and there is no change in collagen fiber deposition in the lung compared to that observed in 3-month mutants. A percentage of thymus mass was reduced only in mutant animals at 12 months versus wild at 3 months (P <0.05) and there was no difference in spleen mass between groups. However, at 3 months, the mutants increased IL-1b, IL-8 and TNF-, a response that was not observed at 12 months. In both wild and mutant 12 month animals, reduction of the uterine mass percentage (P <0.05), without, however, the levels of estrogen in the blood. Finally, at 3 months there was an increase in non-lung nitrite / nitrate of the mutant animals, a fact that was not observed at 12 months. Conclusion: Our data demonstrate that the cholinergic system modulates pulmonary inflammation in young animals. Although VAChT-deficient animals maintain the phenotype over the long term, inflammation and oxidative stress in the lung appear to be controlled over time. The exact mechanisms of this adaptation have not yet been fully elucidated, but there seems to be no relation to estrogen levels.
O sistema colinérgico anti-inflamatório tem sido estudado em diversas doenças e já foi demonstrado que alterações nesta via pioram a inflamação do organismo. A deficiência colinérgica causada pela redução na expressão da proteína transportadora vesicular da acetilcolina (VAChT), responsável pelo transporte da acetilcolina (ACh) para dentro das vesículas, está intimamente relacionada à redução da liberação de ACh. Nosso grupo demonstrou recentemente que animais com redução de VAChT apresentaram inflamação pulmonar em camundongos com 3 meses de vida. Entretanto, pouco se sabe dos efeitos da deficiência colinérgica em longo prazo em animais com 12 meses, idade correspondente ao início da senilidade e que sabidamente pode haver maior injúria pulmonar. Objetivo: Comparar a inflamação pulmonar induzida pela redução VAChT em animais com 3 meses e 12 meses de idade. Materiais e Método: Foram utilizadas fêmeas com 3 e 12 meses de idade selvagens ou mutantes para VAChT. Os animais foram pesados e submetidos ao Wire Hang teste. Após anestesia, o lavado broncoalveolar (LBA) foi retirado para quantificação de células e de citocinas. Em seguida, o sangue, pulmão, baço, timo e útero foram coletados para análises posteriores. Ainda foram quantificadas células na medula óssea e os níveis de citocinas no baço, além do nível de estrógeno no sangue e de nitrito e nitrato no pulmão. Os dados foram analisados estatisticamente pelo programa Sigma Stat e considerado significativo um p<0,05. Resultados: Todos os animais com redução de VAChT tiveram redução do tempo de sustentação na grade (P<0,001) e da massa corpórea (P<0,01) em relação aos seus controles selvagens. Ainda, os animais selvagens com 12 meses tiveram redução no tempo de sustentação na grade em relação aos selvagens com 3 meses (P≤0,001). Animais mutante apresentaram uma diminuição das células totais na medula óssea (P<0,05), aumento no número de células totais no LBA (P<0,05), e de eosinófilos (P<0,05), além do aumento dos níveis de TNF-α, IL-6, IL-8 e IL-1β (P<0,01) e deposição de fibras colágenas em 3 meses comparado aos animais selvagens de mesma idade. Aos 12 meses, as células no pulmão e as citocinas foram reduzidas nos mutantes (P<0,05) e não houve alteração da deposição de fibras colágenas no pulmão em relação ao observado nos mutantes de 3 meses. A porcentagem de massa do timo estava reduzida apenas nos animais mutante com 12 meses em relação ao selvagem com 3 meses (P<0,05) e não houve diferença na massa do baço entre os grupos. Entretanto, aos 3 meses, os mutantes apresentam aumento de IL-1b, IL-8 e TNF-, resposta que não foi observada aos 12 meses. Nos animais de 12 meses tanto selvagens quanto mutante houve redução da porcentagem de massa do útero (P<0,05), sem, no entanto alterar os níveis de estrógeno no sangue. Por fim, aos 3 meses há aumento de nitrito/nitrato no pulmão dos animais mutantes, fato que não foi observado aos 12 meses. Conclusão: Nossos dados demonstraram que o sistema colinérgico modula a inflamação pulmonar em animais jovens. Embora os animais com deficiência de VAChT mantenham o fenótipo a longo prazo, a inflamação e o estresse oxidativo no pulmão parece ser controlada ao longo do tempo. Os exatos mecanismos desta adaptação ainda não foram totalmente elucidados, mas parece não haver relação com os níveis de estrógeno.
O sistema colinérgico anti-inflamatório tem sido estudado em diversas doenças e já foi demonstrado que alterações nesta via pioram a inflamação do organismo. A deficiência colinérgica causada pela redução na expressão da proteína transportadora vesicular da acetilcolina (VAChT), responsável pelo transporte da acetilcolina (ACh) para dentro das vesículas, está intimamente relacionada à redução da liberação de ACh. Nosso grupo demonstrou recentemente que animais com redução de VAChT apresentaram inflamação pulmonar em camundongos com 3 meses de vida. Entretanto, pouco se sabe dos efeitos da deficiência colinérgica em longo prazo em animais com 12 meses, idade correspondente ao início da senilidade e que sabidamente pode haver maior injúria pulmonar. Objetivo: Comparar a inflamação pulmonar induzida pela redução VAChT em animais com 3 meses e 12 meses de idade. Materiais e Método: Foram utilizadas fêmeas com 3 e 12 meses de idade selvagens ou mutantes para VAChT. Os animais foram pesados e submetidos ao Wire Hang teste. Após anestesia, o lavado broncoalveolar (LBA) foi retirado para quantificação de células e de citocinas. Em seguida, o sangue, pulmão, baço, timo e útero foram coletados para análises posteriores. Ainda foram quantificadas células na medula óssea e os níveis de citocinas no baço, além do nível de estrógeno no sangue e de nitrito e nitrato no pulmão. Os dados foram analisados estatisticamente pelo programa Sigma Stat e considerado significativo um p<0,05. Resultados: Todos os animais com redução de VAChT tiveram redução do tempo de sustentação na grade (P<0,001) e da massa corpórea (P<0,01) em relação aos seus controles selvagens. Ainda, os animais selvagens com 12 meses tiveram redução no tempo de sustentação na grade em relação aos selvagens com 3 meses (P≤0,001). Animais mutante apresentaram uma diminuição das células totais na medula óssea (P<0,05), aumento no número de células totais no LBA (P<0,05), e de eosinófilos (P<0,05), além do aumento dos níveis de TNF-α, IL-6, IL-8 e IL-1β (P<0,01) e deposição de fibras colágenas em 3 meses comparado aos animais selvagens de mesma idade. Aos 12 meses, as células no pulmão e as citocinas foram reduzidas nos mutantes (P<0,05) e não houve alteração da deposição de fibras colágenas no pulmão em relação ao observado nos mutantes de 3 meses. A porcentagem de massa do timo estava reduzida apenas nos animais mutante com 12 meses em relação ao selvagem com 3 meses (P<0,05) e não houve diferença na massa do baço entre os grupos. Entretanto, aos 3 meses, os mutantes apresentam aumento de IL-1b, IL-8 e TNF-, resposta que não foi observada aos 12 meses. Nos animais de 12 meses tanto selvagens quanto mutante houve redução da porcentagem de massa do útero (P<0,05), sem, no entanto alterar os níveis de estrógeno no sangue. Por fim, aos 3 meses há aumento de nitrito/nitrato no pulmão dos animais mutantes, fato que não foi observado aos 12 meses. Conclusão: Nossos dados demonstraram que o sistema colinérgico modula a inflamação pulmonar em animais jovens. Embora os animais com deficiência de VAChT mantenham o fenótipo a longo prazo, a inflamação e o estresse oxidativo no pulmão parece ser controlada ao longo do tempo. Os exatos mecanismos desta adaptação ainda não foram totalmente elucidados, mas parece não haver relação com os níveis de estrógeno.