Epidemiologia molecular de isolados clínicos de Klebsiella pneumoniae produtores de KPC-2 Provenientes da cidade de Juiz De Fora - MG
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Data
2017-11-22
Autores
Silva, Ludvick Romão Ribeiro [UNIFESP]
Orientadores
Minarini, Luciene Andrade da Rocha [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
This study aimed at the molecular characterization of clinical isolates of Klebsiella pneumoniae that showed resistance to carbapenems obtained from urine samples from 2009 to 2014, in a private laboratory in Juiz de Fora city (Minas Gerais). The isolates were identified by MALDI-TOF/MS and the antimicrobial susceptibility profile was determined by the Disk-Diffusion and E-test®. Through PCR and sequencing, the resistance genes that encoded carbapenemases, extended-spectrum β-lactamases (ESBL) and Qnr, as well their adjacent gene structures were investigated. The genetic variability was also evaluated by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Seventy-seven percent of the isolates showed multidrug-resistant profile to all of the antimicrobials tested. The genes blaKPC-2 and blaSHV were detected in a total of 18 isolates, followed by blaCTX-M-1-like (n=5), blaCTX-M-2-like (n=2), blaCTX-M-9-like (n=5), blaCTX-M8/25-like (n=2), blaTEM (n=11) and, finally, blaVIM (n=3). The determinant blaKPC-2 was associated to ISKpn7 sequence insertion, related to Tn4401 element. The ISKpn6 element, downstream of blaKPC-2, was not detected in this isolates. Three K. pneumoniae presented isoform “a” associated to Tn4401 and 15 isolates to the isorform “b”. The plasmidial determinant of resistence to quinolone, qnrA1, was detected in 22% (n=4) of the isolates, it was found an association to ISCR1 element, directly to orf513. The gene qnrB1 was detected in 16% (n=3) of K. pneumoniae and their genetic background were not determined in this study. The results obtained highlight the need to improve the knowledge of carbapenem-resistance mechanism in K. pneumoniae from Brazil. The high prevalence of this multidrug-resistant microorganism in the community and nosocomial environment, associated with an important percentage of mortality in patients worldwide, makes K. pneumoniae a major public health threat and the subject of continuous epidemiological investigations.
Este estudo visou á caracterização molecular de isolados clínicos de Klebsiella pneumoniae que apresentaram resistência aos carbapenêmicos obtidos de amostras de urina no período de 2009 a 2014, em laboratório privado na cidade de Juiz de Fora, Minas Gerais. Os isolados tiveram sua identificação comprovada por MALDI-TOF/MS e o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos foi determinado pelo método Disco-Difusão e E-test. Por PCR e sequenciamento, os genes de resistência que codificam carbapenemases, β-lactamases de espectro ampliado (ESBL) e Qnr, bem como suas estruturas gênicas adjacentes, foram investigados. A variabilidade genética também foi avaliada por eletroforese em campos pulsados (PFGE). Setenta e sete porcento dos isolados apresentaram perfil de multirresistência a todos os antimicrobianos testados. Os genes blaKPC-2 like e blaSHV -like foram detectados em todos os 18 isolados, seguidos de fragmentos compatíveis com os genes blaCTX-M-1-like (n=5), blaCTX-M-2-like (n=2), blaCTX-M-9- like (n=5), blaCTX-M8/25 - like (n=2), blaTEM -like (n=11) e, por fim, blaVIM -like (n=3). Os determinantes blaKPC-2 estiveram associados à sequência de inserção ISKpn7, associado ao elemento Tn4401. O elemento ISKpn6, à jusante do blaKPC-2, não foi detectado nos isolados do estudo. Três K. pneumoniae apresentaram a isoforma “a” associada ao Tn4401 e 15 isolados a isoforma “b”. O determinante plasmideal de resistência à quinolona, qnrA1, foi detectado em 22% (n=4) dos isolados, sendo encontrado associado ao elemento ISCR1, diretamente à orf513. O gene qnrB1 foi detectado em 16% (n=3) das K. pneumoniae do estudo e não tiveram seus contextos genéticos determinados nesse estudo. Os resultados obtidos enfatizam a necessidade de melhor compreensão dos mecanismos de resistência em K. pneumoniae frente aos carbapenêmicos no Brasil. A alta prevalência deste micro-organismo multirresistente na comunidade e ambiente nosocomial, associada com importante percentual de mortalidade em pacientes de todo o mundo, faz com que a K. pneumoniae seja uma grande ameaça á saúde pública e alvo de contínuas investigações epidemiológicas.
Este estudo visou á caracterização molecular de isolados clínicos de Klebsiella pneumoniae que apresentaram resistência aos carbapenêmicos obtidos de amostras de urina no período de 2009 a 2014, em laboratório privado na cidade de Juiz de Fora, Minas Gerais. Os isolados tiveram sua identificação comprovada por MALDI-TOF/MS e o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos foi determinado pelo método Disco-Difusão e E-test. Por PCR e sequenciamento, os genes de resistência que codificam carbapenemases, β-lactamases de espectro ampliado (ESBL) e Qnr, bem como suas estruturas gênicas adjacentes, foram investigados. A variabilidade genética também foi avaliada por eletroforese em campos pulsados (PFGE). Setenta e sete porcento dos isolados apresentaram perfil de multirresistência a todos os antimicrobianos testados. Os genes blaKPC-2 like e blaSHV -like foram detectados em todos os 18 isolados, seguidos de fragmentos compatíveis com os genes blaCTX-M-1-like (n=5), blaCTX-M-2-like (n=2), blaCTX-M-9- like (n=5), blaCTX-M8/25 - like (n=2), blaTEM -like (n=11) e, por fim, blaVIM -like (n=3). Os determinantes blaKPC-2 estiveram associados à sequência de inserção ISKpn7, associado ao elemento Tn4401. O elemento ISKpn6, à jusante do blaKPC-2, não foi detectado nos isolados do estudo. Três K. pneumoniae apresentaram a isoforma “a” associada ao Tn4401 e 15 isolados a isoforma “b”. O determinante plasmideal de resistência à quinolona, qnrA1, foi detectado em 22% (n=4) dos isolados, sendo encontrado associado ao elemento ISCR1, diretamente à orf513. O gene qnrB1 foi detectado em 16% (n=3) das K. pneumoniae do estudo e não tiveram seus contextos genéticos determinados nesse estudo. Os resultados obtidos enfatizam a necessidade de melhor compreensão dos mecanismos de resistência em K. pneumoniae frente aos carbapenêmicos no Brasil. A alta prevalência deste micro-organismo multirresistente na comunidade e ambiente nosocomial, associada com importante percentual de mortalidade em pacientes de todo o mundo, faz com que a K. pneumoniae seja uma grande ameaça á saúde pública e alvo de contínuas investigações epidemiológicas.