Estudo da expressãode proteínas envolvidas nas vias de sinalização pl3k/akt e ras/erk em células endoteliais resistentes ao anoikis
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Data
2014-07-30
Autores
Pernambuco Filho, Paulo Castanho de Almeida [UNIFESP]
Orientadores
Azevedo, Carla Cristina Lopes de Azevedo [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Resumo
The acquisition of cell death resistance induced by blocking adhesion to the substrate (anoikis resistance) is a hallmark of neoplastic transformation and a critica I step during the metastatic processo PI3K1AKT and Ras/ERK signaling pathways are directly related to the growth, proliferation and cell survival. Changes in these pathways can also lead to neoplastic transformation. Aiming to clarify the signaling pathways involved in the processes of cell transformation and anoikis, wild endothelial cells (EC) were subjected to transformation induced by blockade of adhesion to the substrate (adhEü) and studied in comparison with endothelial cells transfected with the EJ-ras oncogene (EJ-ras EC) in relation to: cell growth; apoptosis; invasiveness; expression and localization of proteins involved in PI3K/AKT and Ras/ERK pathways. Anoikis resistant cells show characteristics similar to tumorigenic cells: multilayer growth, loss of contact inhibition, tumorigenic capacity, a high invasive potential and a low rate of apoptosis. Treatment with the inhibitor LY294002 led to a decrease in cell growth and increased rates of apoptosis in ali cell types studied. In relation to proteins expression involved in PI3K1AKT and Ras/ERK signaling pathway, Adh-EC clones showed an increase in expression of PI3K, AKT, mTOR, Ras and ERK compared to wild type cells. The expression of these proteins was inhibited after treatment with the inhibitor LY294002 (PI3K, AKT, mTOR) and U0126 (Ras and ERK) in ali cell types. We also observed that the gene expression of PI3K and mTOR is increased and the gene expression of PTEN is decreased in the Adh-EC clones relative to wild type cells. These data suggest that the PI3K1AKT and Ras/ERK signaltng pathways are related to acquisition of resistance to anoikis in endothelial cells. ix
A aquisição da resistência à morte celular induzida por bloqueio da adesão ao substrato (resistência ao anoikis) é uma característica da transformação neoplásica e um passo crítico durante o processo metastático. As vias de sinalização PI3K1AKT e Ras/ERK estão diretamente relacionadas com o crescimento, a proliferação e a sobrevivência celular. Alterações nessas vias também podem levar à transformação neoplásica. Buscando estudar as vias de sinalização celular envolvidas no processo de anoikis e nos processos de transformação celular, células endoteliais selvagens (EC) foram submetidas à transformação induzida pelo impedimento de adesão (Adh-EC) e estudadas comparando-se com células endoteliais transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras EC) em relação: ao crescimento celular; à apoptose; à capacidade invasiva e à expressão e localização de proteínas envolvidas nas vias PI3K/AKT e Ras/ERK. As células resistentes ao anoikis apresentaram características similares às células tumorigênicas: crescimento em multicamadas, perda de inibição por contato, capacidade tumorigênica, diminuição da capacidade adesiva e resistência à apoptose. O tratamento com o inibidor LY294002 levou à uma diminuição no crescimento e um aumento nas taxas de apoptose em todos os tipos celulares estudados. Em relação à expressão de proteínas que participam das vias de sinalização PI3K1AKT e Ras/ERK, os clones Adh-EC apresentaram um aumento na expressão de PI3K, AKT, mTOR, Ras e ERK em relação às células selvagens. A expressão dessas proteínas foi inibida após tratamento com o inibidor LY294002 (PI3K, AKT, mTOR) e U01?6 (Ras e Erk) em todos os tipos celulares. Também observamos que a expressão gênica de PI3K e mTOR está aumentada e a expressão gênica de PTEN está diminuída nos clones Adh-EC em relação às células selvagens. Estes dados sugerem que as vias de sinalização PI3K/AKT e Ras/Erk estão relacionadas com a aquisição da resistência ao anoikis em células endoteliais. VIII
A aquisição da resistência à morte celular induzida por bloqueio da adesão ao substrato (resistência ao anoikis) é uma característica da transformação neoplásica e um passo crítico durante o processo metastático. As vias de sinalização PI3K1AKT e Ras/ERK estão diretamente relacionadas com o crescimento, a proliferação e a sobrevivência celular. Alterações nessas vias também podem levar à transformação neoplásica. Buscando estudar as vias de sinalização celular envolvidas no processo de anoikis e nos processos de transformação celular, células endoteliais selvagens (EC) foram submetidas à transformação induzida pelo impedimento de adesão (Adh-EC) e estudadas comparando-se com células endoteliais transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras EC) em relação: ao crescimento celular; à apoptose; à capacidade invasiva e à expressão e localização de proteínas envolvidas nas vias PI3K/AKT e Ras/ERK. As células resistentes ao anoikis apresentaram características similares às células tumorigênicas: crescimento em multicamadas, perda de inibição por contato, capacidade tumorigênica, diminuição da capacidade adesiva e resistência à apoptose. O tratamento com o inibidor LY294002 levou à uma diminuição no crescimento e um aumento nas taxas de apoptose em todos os tipos celulares estudados. Em relação à expressão de proteínas que participam das vias de sinalização PI3K1AKT e Ras/ERK, os clones Adh-EC apresentaram um aumento na expressão de PI3K, AKT, mTOR, Ras e ERK em relação às células selvagens. A expressão dessas proteínas foi inibida após tratamento com o inibidor LY294002 (PI3K, AKT, mTOR) e U01?6 (Ras e Erk) em todos os tipos celulares. Também observamos que a expressão gênica de PI3K e mTOR está aumentada e a expressão gênica de PTEN está diminuída nos clones Adh-EC em relação às células selvagens. Estes dados sugerem que as vias de sinalização PI3K/AKT e Ras/Erk estão relacionadas com a aquisição da resistência ao anoikis em células endoteliais. VIII
Descrição
Citação
PERNAMBUCO FILHO, Paulo Castanho de Almeida. Estudo da expressãode proteínas envolvidas nas vias de sinalização pl3k/akt e ras/erk em células endoteliais resistentes ao anoikis. 2014. 73 f. Dissertação (Mestrado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2014.