Efeito da melatonina, metformina e citrato de clomifeno no ovário de ratas em estro permanente
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Data
2016-12-21
Autores
Lombardi, Leonardo Augusto [UNIFESP]
Orientadores
Simões, Manuel de Jesus [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Analysing histomorphometric and immunohistochemical changes in the interstitial cells and ovarian follicles of rats treated with melatonin, metformin and clomiphene citrate before and after induction of permanent estrus. Methods: Seventy rats were divided into thirteen groups. The groups were divided into 2 experiments. Experiment 1 was composed of rats in the physiological estrus phase (GSham), rats in continuous light induced permanent estrus (GCtrl). In addition, a second group of rats received melatonin, metformin or clomiphene citrate in isolation and associated for a period of 60 days of exposure to continuous illumination, being considered as a prevention group. Experiment 2 was composed of animals in permanent estrus previously induced by the 60 day exposure by continuous illumination that after exposure to light, remained exposed and received melatonin, metformin and Clomiphene citrate as a form of treatment. GSham animals remained in the light period from 7:00 am to 7:00 p.m., while animals from the control group and other treated groups remained under continuous illumination (400 Lux) for a period of 60 days for experiment 1 and a total of 120 days for experiment 2. At the end of this period all animals were anesthetized. Futhermore, the ovaries were removed, fixed in 10% formalin and processed for inclusion in paraffin. Histological sections with 5 ?m were collected on slides and submitted to HE staining for morphological analysis and immunohistochemical methods for the detection of anti-Ki-67 (cell proliferation) and anti-caspase-3 (Apoptosis). Results: The presence of luteal bodies and an increase in the number of primary and antral follicles were observed in all animals treated in both experiments, as well as a decrease in the area occupied by interstitial cells and in the nuclear volume of interstitial cells. These data is more evident in animals treated with melatonin alone and associated with another drug. The immunohistochemical findings presented greater expression of follicular cells to ki-67 in all animals treated in both experiments, being these data more expressive in animals treated with clomiifene citrate. The immunoexpression to caspase 3 was shown to be significantly greater in interstitial cells and lower in granulosa cells in treated animals from both experiments. Conclusion: The administration of melatonin, metformin and clomiphene citrate applied alone or in combination, before and after induction to the permanent estrous state showed an improvement in physiological function and in the ovarian morphology.
Analisar as alterações histomorfométricas e imuno-histoquímicas nas células intersticiais e folículos ovarianos de ratas tratadas com melatonina, metformina e citrato de clomifeno antes ou após a indução do estro permanente. Métodos: Setenta ratas foram divididas em treze grupos. Os grupos foram divididos em 2 experimentos. O Experimento 1 foi composto por ratas na fase de estro fisiológico (GSham), ratas em estro permanente induzido pela iluminação contínua (GCtrl), além de animais que receberam melatonina, metformina ou citrato de clomifeno de forma isolada e associada durante um período de 60 dias de exposição a iluminação contínua, sendo considerado grupo de prevenção, já o experimento 2 foi constituído por animais em estro permanente previamente induzidos pela exposição de 60 dias a iluminação contínua que, após a exposição a luz, permaneceram expostos e receberam melatonina, metformina e citrato de clomifeno como forma de tratamento. Os animais do GSham permaneceram com período de luz das 7:00 as 19:00 horas, enquanto que os animais do grupo controle e demais grupos tratados permaneceram sob iluminação contínua (400 Lux), durante um período de 60 dias para o experimento 1 e um período total de 120 dias os animais do experimento 2. Ao final desse período todos os animais foram anestesiados e retirados os ovários que foram fixados em formol a 10% e processados para inclusão em parafina. Cortes histológicos com 5 ?m foram coletados em laminas e submetidos a coloração pelo H.E e imunoistoquímica. Resultados: Observou-se presença de corpos lúteos e aumento do número de folículos primários e antrais em todos os animais tratados em ambos os experimentos, além de uma diminuição da área de ocupação de células intersticiais e diminuição do volume nuclear de células intersticiais, sendo estes dados mais evidentes nos animais tratados com melatonina de forma isolada e associada a outro fármaco. Os achados imunoistoquímicos mostraram maior expressão de células foliculares ao ki-67 em todos os animais tratados em ambos os experimentos, sendo estes dados mais expressivos em animais tratados com citrato de clomiifeno, já a imunoexpressão a caspase 3 mostrou-se significativamente maior em células intersticiais e menor em células da granulosa nos animais tratados de ambos os experimentos. Conclusão: A administração da melatonina, metformina e citrato de clomifeno aplicada de forma isolada ou em associação, antes e após a indução ao estado de estro permanente, mostrou haver melhora da função ovariana.
Analisar as alterações histomorfométricas e imuno-histoquímicas nas células intersticiais e folículos ovarianos de ratas tratadas com melatonina, metformina e citrato de clomifeno antes ou após a indução do estro permanente. Métodos: Setenta ratas foram divididas em treze grupos. Os grupos foram divididos em 2 experimentos. O Experimento 1 foi composto por ratas na fase de estro fisiológico (GSham), ratas em estro permanente induzido pela iluminação contínua (GCtrl), além de animais que receberam melatonina, metformina ou citrato de clomifeno de forma isolada e associada durante um período de 60 dias de exposição a iluminação contínua, sendo considerado grupo de prevenção, já o experimento 2 foi constituído por animais em estro permanente previamente induzidos pela exposição de 60 dias a iluminação contínua que, após a exposição a luz, permaneceram expostos e receberam melatonina, metformina e citrato de clomifeno como forma de tratamento. Os animais do GSham permaneceram com período de luz das 7:00 as 19:00 horas, enquanto que os animais do grupo controle e demais grupos tratados permaneceram sob iluminação contínua (400 Lux), durante um período de 60 dias para o experimento 1 e um período total de 120 dias os animais do experimento 2. Ao final desse período todos os animais foram anestesiados e retirados os ovários que foram fixados em formol a 10% e processados para inclusão em parafina. Cortes histológicos com 5 ?m foram coletados em laminas e submetidos a coloração pelo H.E e imunoistoquímica. Resultados: Observou-se presença de corpos lúteos e aumento do número de folículos primários e antrais em todos os animais tratados em ambos os experimentos, além de uma diminuição da área de ocupação de células intersticiais e diminuição do volume nuclear de células intersticiais, sendo estes dados mais evidentes nos animais tratados com melatonina de forma isolada e associada a outro fármaco. Os achados imunoistoquímicos mostraram maior expressão de células foliculares ao ki-67 em todos os animais tratados em ambos os experimentos, sendo estes dados mais expressivos em animais tratados com citrato de clomiifeno, já a imunoexpressão a caspase 3 mostrou-se significativamente maior em células intersticiais e menor em células da granulosa nos animais tratados de ambos os experimentos. Conclusão: A administração da melatonina, metformina e citrato de clomifeno aplicada de forma isolada ou em associação, antes e após a indução ao estado de estro permanente, mostrou haver melhora da função ovariana.
Descrição
Citação
LOMBARDI, Leonardo Augusto. Efeito da melatonina, metformina e citrato de clomifeno no ovário de ratas em estro permanente. 2016. 106 f. Tese (Doutorado em Biologia Estrutural e Funcional) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.