Analise dos niveis de peroxidacao lipidica, da funcao dos espermatozoides e do perfil proteico do plasma seminal de adolescentes antes e apos a varicocelectomia
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Data
2009
Autores
Del Giudice, Paula Toni [UNIFESP]
Orientadores
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Introdução: a varicocele e uma das principais causas de infertilidade masculina tratavel. Sua incidencia na populacao masculina e de 15%. Alem de ser uma doenca que geralmente apresenta seu inicio durante a adolescencia, a varicocele demonstra ter um carater progressivo e apresenta impacto nas variaveis seminais e na funcao dos espermatozoides. Objetivos: avaliar o efeito da varicocelectomia na funcao dos espermatozoides, na peroxidacao lipidica e no perfil proteico de plasma seminal de adolescentes. Metodo: as amostras foram obtidas e analisadas de acordo com os parametros da OMS (1999) e morfologia segundo criterio estrito de Kruger (1986). O grupo de estudo incluiu 27 adolescentes com indicacao de tratamento cirurgico da varicocele. A integridade do DNA nuclear dos espermatozoides foi avaliada pelo ensaio Cometa alcalino, e as celulas foram classificadas de acordo com a intensidade de dano no DNA: grau I (alta integridade do DNA), grau II (DNA ainda integro ou em inicio de fragmentacao), grau III (DNA moderadamente fragmentado) e grau IV (DNA altamente fragmentado). A atividade mitocondrial foi avaliada pelo metodo colorimetrico proposto por Hrudka (1987), e as celulas foram classificadas em: classe I (mitocondrias todas ativas), classe II (mais de 50% de mitocondrias ativas), classe III (menos de 50% de mitocondrias ativas) e classe IV (mitocondrias todas inativas). A peroxidacao lipidica foi determinada usando-se o metodo descrito por Ohkawa (1979), que se baseia na determinacao de MDA devido a sua reacao com o TBA, e o nivel de peroxidacao lipidica foi descrito em nanogramas de TBARS/mL de semen. O perfil proteico de plasma seminal foi avaliado por eletroforese bidimensional de proteinas em gel de poliacrilamida. As proteinas foram quantificadas e foi preparado um pool para cada grupo (Pre e Pos) e corridos em triplicata. As proteinas foram separadas por 2D SDS-PAGE em uma fita de 18cm, pI 3-10, em gel de gradiente 10-17.5%. Os geis foram corados, digitalizados e comparados atraves do ImageMaster 2D platinum 6.0. Os spots de interesse (estatisticamente diferentes entre os grupos) foram identificados atraves da comparacao de pI e massa molecular no banco de dados ExPASy e as proteinas foram identificadas atraves de Maldi-Quad-ToF MS/MS. Resultados: quanto a integridade do DNA, as amostras pos-varicocelectomia apresentaram maior porcentagem de celulas grau I (p=0,011), e menor porcentagem de celulas grau II (p=0,0002), grau III (p=0,023) e grau IV (p=0,001). Quanto a atividade mitocondrial, as amostras pos-varicocelectomia apresentaram menor porcentagem de celulas classe III (p=0,013). Nao houve diferenca nas classes I, II e IV. Com relacao ao nivel de peroxidacao lipidica, nao foi encontrada nenhuma diferenca estatisticamente significante entre as amostras pre e pos-varicocelectomia. Por fim, em relacao ao perfil proteico, foram identificados 23 spots diferencialmente expressos entre as amostras pre e pos. As proteinas identificadas pertencem a resposta inflamatoria, ao processo de coagulacao, participantes no processo de fertilizacao, no processo de espermatogenese e componentes de HDL. Os resultados obtidos pela espectrometria de massas indicaram as proteinas fosfatase acida prostatica, antigeno prostatico especifico, calicreina-2 e proteina indutora de prolactina. Conclusoes: Neste estudo, a varicocelectomia promoveu melhora na funcao dos espermatozoides. Todavia, nenhuma diferenca entre os niveis seminais de MDA foi encontrada. Em relacao ao proteoma, a varicocelectomia promoveu alteracao no perfil proteico bidimensional em plasma seminal
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2009. 104 p.