Análise do perfil de expressão de micrornas em saliva de pacientes com carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço

Abstract

O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECP) é uma doença com alta incidência e alta mortalidade, sendo a sexta neoplasia mais comum em todo o mundo. O diagnóstico geralmente é realizado tardiamente, após o surgimento de lesões visíveis. A descoberta de perfis epigenéticos alterados em neoplasias despertou para novos paradigmas nos quais mecanismos moleculares contribuem significativamente para a carcinogênese. Até o momento, já foram descritos aproximadamente 1.000 microRNAs (miRNAs) distintos e estima-se que estes possam influenciar a expressão de até um terço dos genes humanos. O objetivo deste estudo foi analisar o perfil de expressão de miRNAs em amostras de saliva de pacientes portadores de CECP coletadas ao diagnóstigo e após o último tratamento curativo, afim de identificar miRNAs que possam ser úteis como marcadores de prognóstico para os portadores de CECP. Em uma análise exploratória, a expressão de 667 miRNAs foi avaliada em sete amostras de saliva, sendo quatro tumorais e três normais. Esta análise apontou 101 miRNAs diferencialmente expressos. Em seguida, uma criteriosa avaliação estatística e uma revisão dos dados da literatura permitiu a seleção de quatro candidatos (miRNA-30b, miRNA-143, miRNA-188-5p e miRNA-584). A avaliação da expressão destes candidatos em um grupo de amostras de saliva colhidas ao diagnóstico e de indivíduos sem câncer revelou que apenas os miR-30b e miR 143 apresentavam uma expressão específica. Portanto, a expressão destes dois miRNAs, 30b e 143 foi analisada nas 99 amostras de saliva de CECP coletadas ao diagnóstico e em 47 amostras de indivíduos normais (controles). Ambos miRNAs estavam hipoexpressos nas amostras tumorais pré-tratamento, com especificidades de 95,7% e 93,6%, respectivamente. Em seguida a expressão deste miRNAs foi avaliada em 77 amostras de saliva colhidas de portadores de CECP após o tratamento e os resultados revelaram uma redução na frequencia de hipoexpressão para 13% e 9%, para o miRNA-30b e miRNA-143, respectivamente. A hipoexpressão do miRNA-30b apresentou associação significativa com idade, ruptura capsular e comprometimento linfonodal. Já a hipoexpressão do miRNA-143 apresentou associação significativa com a presença de células tumorais nas margens cirúrgicas e comprometimento linfonodal. Esta associação com conhecidos indicadores clínicos de mau prognóstico sugere que a detecção de hipoexpressão dos miR 30b e miR 143 em amostras de saliva possa ser útil como marcador molecular prognóstico para os portadores de CECP.

Head and neck Squamous cell carcinoma ( HNSCC ) is a disease with high incidence and high mortality, and the sixth most common cancer worldwide. The diagnosis is usually performed late , after the appearance of visible lesions. The discovery of altered epigenetic profiles in cancer awakened to new paradigms in molecular mechanisms which contribute significantly to carcinogenesis. So far, have been described about 1,000 microRNAs (miRNAs) and it is estimated that they may influence the expression of up to one third of human genes. The aim of this study was to analyze the expression profile of miRNAs in saliva samples from patients with HNSCC at diagnosis and collected after the last curative treatment in order to identify miRNAs that may be useful as a prognostic markers for patients with HNSCC. In our exploratory analysis 667 miRNA expression was assessed in seven saliva samples, four tumor samples and three normal samples. This analysis revealed 101 differentially expressed miRNAs, then , a rigorous statistical evaluation and a review of the literature allowed the selection of four candidates ( miRNA - 30b , miRNA -143 , miRNA -188 - 5p and miRNA -584 ) . The expression of these candidates in a group of saliva samples collected at diagnosis and cancer-free individuals showed that only miR- 143 and miR 30b had a specific expression. Therefore, the expression of these two miRNAs, 30b and 143 was analyzed in the 99 saliva samples collected at diagnosis of HNSCC and 47 samples from healthy individuals (controls). Both miRNAs were downregulated at the pretreatment tumor samples , with specificity of 95.7 % and 93.6 % , respectively. Then the expression of miRNA was evaluated in 77 saliva samples collected from patients with HNSCC after curative treatment and the results showed a reduction in the frequency of downregulation to 13% and 9 % for miRNA and miRNA- 30b -143 , respectively. The downregulated miRNA - 30b was significantly associated with age, capsular rupture and lymph node involvement. Already downregulated miRNA -143 was significantly associated with the presence of tumor cells in the surgical margins and lymph node involvement. This known association with clinical indicators of poor prognosis suggests that xiii the detection of the downregulated miR 30b and miR 143 in saliva may be useful as a molecular marker of prognosis for patients with HNSCC.